毒性酶类试验.pdfVIP

毒性酶类试验 （一）溶血试验 1、原理: 某些细菌在代谢过程中能产生溶血素，可使人或动 物的红细胞发生溶解，不同的细菌有不同的溶血反应，借此 可鉴别细菌。 2 试验方法: 平板法 试管法 （1）平板法: 将培养物接种于血平板培养基上，36±1 ℃培养24～ 48h， 观察结果。 溶血试验的溶血类型及现象:  （1） α （甲型）溶血: 菌落周围出现较窄的半透明的 草绿色溶血环。  （2） β （乙型）溶血: 菌落周围出现较宽的透明溶 血环。  （3）γ （-丙型）溶血: 菌落周围无溶血环。 （2）试管法: 将待检菌培养液与等量的2%羊血球混合，在36±1 ℃ 培养16～ 18h，观察结果。如溶血，培养液可出现透明状。 3、结果观察与记录: 有溶血现象，为阳性，记+ ； 无溶血现象，为阴性，记 - (二) 链激酶试验 1、原理： A 群链球菌群能产生链激酶，该酶能使血液中的 纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶，而后溶解纤维蛋白，使血凝 块溶解 ,为阳性反应。 此试验用于测定链球菌的致病性。阳性反应具有致病性。 2、试验方法： 吸取草酸钾血浆0.2 mL(0.01 g 草酸钾加5 mL 兔血浆混 匀，经离心沉淀，吸取上清液) ，加入0.8 mL 生理盐水， 混匀后，再加入待检菌36℃下培养18-24h 肉汤培养物 0.5 mL 和0.25 ％氯化钙0.25 mL ，混匀，放37℃水浴中， 2 min 观察一次。 待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2 h 内不溶 化，继续放置 24 h 后观察。同时用肉浸液肉汤做阴性 对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。 3、结果观察与记录； 如凝块全部溶化,为阳性+ 凝块24 h 仍不溶化,为阴性- （三）卵磷脂酶试验 1、原理：某些微生物能产生卵磷脂酶，在钙离子存在时， 能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸胆碱， 在卵黄琼脂平板上菌落周围形成不透明的乳浊环或混浊白 环，或使血清、卵黄液变混浊，以此鉴别细菌。 2、试验方法： （1）卵黄平板法 A 法：将待检菌培养物划线接种或点种于卵黄琼脂平板 上，36 ±1 ℃培养3～ 6h，观察结果。 B 法： 先用卵黄磷脂酶抗血清将平板涂一半，置于 36 ℃待干后， 将待检菌接种于未涂抗血清的一半卵黄琼脂平板上，再转划 已涂过抗血清的一半，36 ±1 ℃厌氧培养24～ 48h ，观察结 果。 在未涂抗血清的一半平板上，菌落周围形成较大的不透明乳 白色混浊区，在涂抗血清的一半平板上，菌落周围无不透明 混浊区，为阳性。 两边均无不透明区，为阴性。 乳糖卵黄琼脂平板,借以确定该菌可否产生卵磷脂酶。 卵磷脂酶具抗原性，其活性可被相应抗血清所抑制， （2）卵黄盐水法： 将庖肉培养基培养物经除菌过滤，收集滤液。在两支灭 菌试管内，每管加入1%卵黄盐水0.4mL,在一管中加入 滤液 0.2mL，另一管加入生理盐水 0.2mL 作对照。在 36 ℃ 水浴中，经2h、 4h、 8h、 24h观察结果。 管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳性。 3、结果观察与记录： 菌落周围形成较大的不透明区，为阳性。 两边均无不透明区，为阴性。 管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳性。 两管无沉淀者，为阴性。 （四）血浆凝固酶试验 1、原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中 的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，附着在细菌的表面，形成凝 块；或作用于血浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使 抗凝的血浆发生凝固现象,为阳性。 2、试验方法 （1）玻片法：取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水， 另一端滴加一滴兔（人）血浆，挑取菌落分别与生理盐水和 血浆混合，5 min 内,如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐 水滴仍呈均匀混浊，则为阳性;如两者呈均匀混浊，无凝固则 为阴性。 （2）试管法：取灭菌小试管 3 支，各加入血浆①－无菌水 (1:1)0.5ml，1支加入被检菌株的营养肉汤培养液（或浓菌悬