限制性酶切方式及连接.pptxVIP

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  • 2022-04-07 发布于上海
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限制性酶切方式及连接第1页/共20页1限制酶切的方式1.1 单酶切 若DNA样品是环状DNA分子,产生与识别序列(n)相同的DNA片段数。 若DNA样品是L—DNA片段,完全酶切产生n+1个DNA片段。 第2页/共20页1限制酶切的方式1.1 单酶切 酶切体系: 13μL ddH2O 反应体系2μL 10×buffer 4μL底物DNA 1μL限制酶 总体积:20μL 第3页/共20页 酶切步骤: ⑴加样; ⑵摇匀,短时离心; ⑶反应1—3h; ⑷反应终止。 65℃水浴10—15min第4页/共20页1限制酶切的方式1.2 双酶切 用不同的限制酶切割同一DNA分子的方法。 环状DNA分子完全酶切的结果,产生DNA片段数是两种限制酶识别序列数之和。 线性DNA分子完全酶切的结果,产生DNA片段数是两种限制酶识别序列数加1. 第5页/共20页双酶切可以在不同的反应系统中进行。A 需要较低盐浓度的酶先切割,然后升高盐浓度,另一个酶切割;B 最适反应温度较低的酶先切割,然后升高温度,另一个酶切割;C 第一个酶切割后,经凝胶电泳回收DNA,再选用合适反应系统,进行第二个酶的切割。第6页/共20页 D 双酶切在同一个反应系统中。 第7页/共20页1 限制酶切的方式1.3 部分酶切 指限制酶对其在DNA分子上的全部识别序列进行不完全的切割。 用途:当某种限制酶

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