染色体工程操作.pptVIP

染色体微切割最常用的方法有两种 微细玻璃针切割法：采用特细的玻璃针（尖端直径约为0.17μm）在倒置显微镜下对目的基因所在染色体区段进行切割与分离。 显微激光切割法： 将染色体标本在底部贴有特殊薄膜的培养皿上制作，利用 激光共聚焦扫描显微系统，依靠高能量激光照射非选择细胞或染色体，使其受热蒸发，最后只留下目的染色体。 第30页，共49页，编辑于2022年，星期一 第四节 染色体介导的基因转移技术 将同特定基因表达有关的染色体或染色体片段转入受体细胞，使该基因得以表达，并能在细胞分裂中一代又一代地转递下去。该技术称为染色体介导的基因转移技术，又称为染色体转导。 微细胞介导的基因转移法（Microcell mediated gene transfer，MMGT） 染色体介导的基因转移法（Chromosome mediated gene transfer，CMGT） 第31页，共49页，编辑于2022年，星期一 微细胞介导的基因转移法 微细胞是指含有一条或几条染色体，外有一薄层细胞质和一个完整质膜的核质体。 第32页，共49页，编辑于2022年，星期一 微细胞制备 微细胞融合 第33页，共49页，编辑于2022年，星期一 微细胞的制备 第34页，共49页，编辑于2022年，星期一 微细胞的融合 第35页，共49页，编辑于2022年，星期一 关于染色体工程操作 第1页，共49页，编辑于2022年，星期一 第2页，共49页，编辑于2022年，星期一 染色体变异 染色体结构变异 染色体易位：一个染色体上某一区段与另一非同源染色体上的区段发生互换。 染色体缺失：染色体的某一区段及其带有的基因一起丢失 染色体倒位：染色体上某一区段连同它带有的基因顺序发生180度倒转。 染色体重复：一个染色体上增加了相同的某个区段。 第3页，共49页，编辑于2022年，星期一 染色体变异 染色体数变异 一是体细胞内以染色体组为基数进行的整倍性变化，以整倍体染色体数目变化产生的变异会产生多倍体和单倍体； 另一种是染色体组内的个别染色体数目有所增减，使细胞内的染色体数目不是基数的的完整倍数，因此被称为非整倍体。 第4页，共49页，编辑于2022年，星期一 什么是染色体工程？ 染色体工程（chromosome engineering）是人们按照一定的设计，有计划地消减、添加或代换同种或异种染色体，从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术。 第5页，共49页，编辑于2022年，星期一 人工诱导多倍体 雌、雄核发育 染色体显微操作技术 染色体介导的基因转移技术 人工染色体 第6页，共49页，编辑于2022年，星期一 第一节 人工诱导多倍体 多倍体（polyploid）这个名词是由Winkler（1916年）首先使用的，它是指每个体细胞中含有三个或更多染色体组的个体而言。染色体组成多倍性现象在高等植物中相当多，但动物界的多倍体现象却少得多。自从60年代发现一种美洲角蛙是一个确定的四倍体动物以来，学者们陆续在低等脊椎动物中发现许多多倍体动物，包括鱼类、两栖类和爬行类。 第7页，共49页，编辑于2022年，星期一 由于多倍体动物具有生长速度快，成活率高及抗病能力强等特点，所以人工诱导多倍体、改善动物经济性状倍受重视。 第8页，共49页，编辑于2022年，星期一 一、人工诱导多倍体的方法 生物学方法 Rasch等（1965）年首次证明了三倍体脊椎动物可以通过杂交产生，他们将雌核发育的二倍体帆鱂（Poecilia formosa）与P.Vittate杂交，得到三倍体后裔。 雌性草鱼（2n=48）与雄性三角鲂（ 2n=48）杂交获得子一代染色体数目为72的草鲂杂种三倍体，其中草鱼提供了二倍数目的染色体（48），三角鲂提供了单倍数目的染色体（24）。 第9页，共49页，编辑于2022年，星期一 异育银鲫与兴国红鲤杂交获得的复合四倍体，通过细胞方法证明其产生的原因是受精卵发生了两性融合。 为什么种间杂交会导致第二极体不排出，从而导致多倍体产生？ 第10页，共49页，编辑于2022年，星期一 人工诱导多倍体的方法 物理学方法 温度休克法：包括冷休克法和热休克法两种，即用略高于或略低于致死温度的冷或热休克来诱导三倍体或四倍体的方法。此法廉价、易操作，是诱导动物细胞多倍体化的常用手段，也有利于养殖场大规模生产使用。 第11页，共49页，编辑于2022年，星期一 水静压法：就是采用较高的水静压（65kg/cm2）来抑制第二极体的放出或第一次卵裂产生多倍体。此种方法诱导率高（90%~100%）、处理时间短（3~5min），对受精卵损伤小、成活率高。但该法需要专门的设备——水压机，成本较高，其样品室容量有限，处理卵的量有限，所以不适于大规模