植物组织培养的基本技术与设施.pptVIP

（二）、试管苗的驯化 驯化的目的: 在于提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高其光合作用的能力，促使试管苗健壮，最终达到提高试管苗的移栽成活率。 驯化的原则： 应从温度、湿度、光照及有无菌态等环境要素进行，驯化开始数天内，应和培养时的环境条件相似；驯化后期，则要与预计的栽培条件相似，从而达到逐步适应的目的。 驯化的方法:炼苗 由培养室转移到半遮荫的自然光下锻炼，在自然光下恢复植物体内叶绿体的光合作用能力和健壮度 打开瓶盖注入少量自来水使幼苗逐渐降低温度，转向有菌，这样幼苗周围的环境就会逐步与自然环境相似。 第31页，共49页，编辑于2022年，星期一 试管苗的驯化 第32页，共49页，编辑于2022年，星期一 （三）、试管苗的移栽 常规移栽法 直接移栽法 嫁接移栽法 指选取生长良好的同一植物的实生苗或幼苗作砧木，用试管苗作接穗进行嫁接的方法。 第33页，共49页，编辑于2022年，星期一 （四）、提高试管苗移栽成活率的途径 试管苗的生理状况 植物生长调节物质 无机盐浓度 活性炭 环境因子 移栽过程中试管苗从无菌向有菌逐渐过渡 第34页，共49页，编辑于2022年，星期一 1．进行植物组织培养需要哪些设备？各有何作用? 2．植物组织培养主要包括哪些环节?各环节的主要工 作内容是什么? 3．培养基包括哪些基本成分?其作用是什么?如何配制? 4．如何对外植体、 培养基、培养器皿、接种器械进 行灭菌？ 5．离体培养的植物材料对光、温、湿度有何要求？ 如何调控？ 6. 何谓玻璃化？何谓褐化？如何克服？ 复 习 思 考 题 第35页，共49页，编辑于2022年，星期一 关于植物组织培养的基本技术与设施 第1页，共49页，编辑于2022年，星期一 外植体（Explants）：指植物离体培养的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质体。 一、 外植体的选择 外植体的选择依据 优良的种质 健壮的植株 大小适宜的外植体 适宜的发育时期 适宜的部位 适宜生理状态和发育年龄的器官 细胞培养材料的选择 第2页，共49页，编辑于2022年，星期一 （二） 外植体灭菌的一般步骤 二、外植体的灭菌 （一）常用灭菌剂的使用及其效果 （三）各种外植体的灭菌方法 第3页，共49页，编辑于2022年，星期一 （一）常用消毒剂 消毒剂 使用浓度（％） 去除的难易 消毒时间（分） 效果 次氯酸钙 次氯酸钠 漂 白 粉 溴 水 过氧化氢 升 汞 酒 精 抗 菌 素 硝 酸 银 9～10 2 饱和溶液 1～2 10～12 0.1～1 70～75 4～5（mg/L） 1 易 易 易 易 最易 较难 易 中 较难 5~30 5~30 5~30 2~10 5~15 2~10 0.2~2 30~60 5~30 很好 很好 很好 很好 好 最好 好 较好 好 自:曹孜义 第4页，共49页，编辑于2022年，星期一 （二） 外植体灭菌的一般步骤 3. 将适当浓度的消毒液(0.1%升汞或2%次氯酸钠)(含有几滴活化剂Tween20或Tween 80)，使材料完全浸没在消毒液中，盖上盖，把玻璃瓶置入超净工作台灭菌一定时间。在灭菌期间须把玻璃瓶摇动2～3次。 4．消毒处理后，将瓶盖打开，将消毒液倒出，注入适量的无菌蒸馏水，再盖上盖，摇动数次，将水倒掉，重复3～4次。 1．预处理，先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。经过预处理的植物材料，其表面仍有很多细菌和真菌。　 2．将植物组织块置于一个有丝盖的玻璃瓶中，注入75%的酒精溶液埋没材料，浸泡10S左右。倒出酒精，用无菌水冲洗一次。 第5页，共49页，编辑于2022年，星期一 1、茎尖、茎段及叶片等的消毒 消毒前要经自来水较长时间的冲洗。 消毒时要用70%的酒精浸泡数秒，无菌水冲洗2～3次，然后用2%～10%的次氯酸钠溶液浸泡10～25min，若材料有茸毛最好在消毒液中加入几滴吐温-80，或者用0.1％～0.2％升汞浸泡消毒5～10分钟消毒后，用无菌水冲洗3次后方可接种。 2、果实及种子的消毒 用自来水冲洗10～20分钟或更长，用纯酒精迅速漂洗一下。 果实用2%次氯酸钠溶液浸 10min后，用无菌水冲洗2～3次。 种子要先用10%次氯酸钠浸泡 20～30min甚至几小时。对难以消毒的还可用0.l%升汞或1%～2%溴水消毒5min。 胚或胚乳培养时，对种皮太硬的种子，可先去掉种皮，再用4%～10%的次氯酸钠溶液浸泡8～10min，经无菌水冲洗后