植物组织培养与细胞.pptVIP

3.3.10 植物组织与器官培养存在的问题 1. 研究中的问题 对于植物全能性表达和激素作用机制等尚未开展深入研究，而且对于培养比较困难的植物缺乏研究。 2. 技术上的问题 效率偏低、操作比较繁琐、培养结果比较难以确定等技术问题 还需解决。 3. 可应用性范围 目前有许多植物还未培养成功，许多有意义的杂交亲本或组合 还不能培养成功，或不能有效培养成功。 4. 生物反应器技术 （1）适用于不同培养对象的新型生物反应器的研制。 （2）提高生物反应器技术内部培养物生长的均匀性和空间利用率。 （3）培养物接种、取样、无菌化等操作技术的优化。 （4）不同培养体系生物反应器培养的动力学研究与工艺优化控制。 （5）生物反应器培养的放大技术。 第55页，共113页，编辑于2022年，星期一 3.4 植物细胞培养 3.4.1 定义 3.4.2 植物细胞培养的方法 3.4.3 植物细胞培养的培养基 3.4.4 植物单细胞培养 3.4.5 植物细胞培养的意义 3.4.6 植物细胞的生物反应器大规模培养（自学） 3.4.7 植物细胞两相培养技术（自学） 3.4.8 植物细胞的生物反应器固定化培养（自学） 3.4.9 植物细胞培养存在的问题与发展趋势 第56页，共113页，编辑于2022年，星期一 3.4.1 定义 植物细胞培养（plant cell culture)是指在离体条件下，将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养集中，进行振荡培养，得到分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量细胞群体的一种技术。 植物细胞培养的理论基础是植物细胞的单个细胞内存在生命体的全部能力（全能性）。 第57页，共113页，编辑于2022年，星期一 3.4.2 植物细胞培养的方法 根据培养对象，植物细胞培养主要有单细胞培养、单倍体培养、原生质体培养等。 根据培养系统分为悬浮培养、液体培养、固体培养、固定化培养等。 植物细胞培养系统分类（图示）。 第58页，共113页，编辑于2022年，星期一 细胞培养 固体培养 液体培养 琼脂培养 固定化培养 摇瓶悬浮培养 反应器大规模培养 分批培养 半连续培养 连续培养 恒化培养 恒浊培养 植物细胞培养系统分类 第59页，共113页，编辑于2022年，星期一 3.4.3 植物细胞培养的培养基 培养基（culture medium）是植物细胞培养中最主要的部分，除了培养材料本身的因素外，培养基的种类成分等直接影响培养材料的生长发育，应根据培养材料的种类和培养部位选取适宜的培养基。 第60页，共113页，编辑于2022年，星期一 培养基的主要成分 水 无机成分 有机成分 无机大量元素：在培养基中含量超过100mg/L的无机元素，包括N,P,K,Ca,Mg,S等。 无机微量元素：在培养基中含量低于100mg/L的无机元素，包括Fe,Mn,B,Zn,Cu,Mo,Co,Cl。 糖 维生素 肌醇 氨基酸及有机添加物 植物生长调节物质 琼脂 第61页，共113页，编辑于2022年，星期一 3.4.4 植物单细胞培养 单细胞培养（single cell culture）是从不同植物中获得单细胞无性系进行细胞杂交及研究细胞的分裂、分化、生长及发育的重要方法，并为大规模培养奠定基础。 分离的单细胞 看护培养 微室培养 平板培养 悬浮培养 单细胞无性系 第62页，共113页，编辑于2022年，星期一 1. 单细胞制备方法： 愈伤组织或悬浮培养物(常); 用纤维素酶和果胶酸酶从组织分离 （1）机械法 （2）酶解法 （3）愈伤组织诱导法 第63页，共113页，编辑于2022年，星期一 由组织器官经愈伤组织分离单细胞 步骤： 1） 诱导产生愈伤组织； 2） 愈伤组织反复继代，使组织不断增殖，提高愈伤组织松散性； 茎段 第64页，共113页，编辑于2022年，星期一 悬浮振荡培养 3）将愈伤组织在液体培养基中培养，建立悬浮培养物 优点：细胞团成小细胞团或单细胞；在培养基中均匀分布；有空气交流。 第65页，共113页，编辑于2022年，星期一 2. 单细胞培养方法 （Single cell culture） 第66页，共113页，编辑于2022年，星期一 单细胞培养常用的方法： 单细胞培养方法 看护培养法 微室培养法 固体平板培养法 液体浅层培养法 第67页，共113页，编辑于2022年，星期一 （1）看护培养法（Nurse culture） 用途：诱导形成单细胞系。 含义：指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。 用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，