植物组织培养的基本技术 (2).pptVIP

培养基蒸气灭菌所需的最少时间 容积/容器（ml） 在121℃下所需要灭菌时间 20~50 15min 75 20min 250~500 25min 1000 30min 1500 35min 2000 40min 第94页，共134页，编辑于2022年，星期一 1 2 3 4 5 6 第95页，共134页，编辑于2022年，星期一 第96页，共134页，编辑于2022年，星期一 A、抗生物质(antibiotic) 种类：青霉素、链霉素、庆大霉素等 用量：5-20mg／L。 作用：防止菌类污染，减少培养中材料的损失。对于刚感染的组织材料，可向培养基中注入5％-10％的抗菌素。 注意：抗生素各有其抑菌谱，要加以选择试用，也可两种抗生素混用。但是应当注意抗生素对植物组织的生长也有抑制作用，使用要慎重。 第62页，共134页，编辑于2022年，星期一 B、抗氧化物(antioxide) 酚污染——植物组织在切割时会溢泌一些酚类物质，接触空气中的氧气后，自动氧化或由酶类催化氧化为相应的醌类，产生可见的茶色、褐色以致黑色。这些物质渗出细胞外就造成自身中毒，使培养的材料生长停顿，失去分化能力，最终变褐死亡。在木本，尤其是热带木本及少数草本植物中较为严重。 第63页，共134页，编辑于2022年，星期一 抗酚类氧化常用的药剂有半胱氨酸及Vc 用量：50-200mg／L的浓度 方法： 洗涤刚切割的外植体表面或过滤灭菌后加入 固体培养基的表层。 其他抗氧化剂：二硫苏糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、及二乙基二硫氨基甲酸酯 第64页，共134页，编辑于2022年，星期一 C、活性炭 主要是利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响 ，例如防止酚类物质污染而引起组织褐化死亡。但活性炭对物质吸附无选择性、既吸有害物质，也吸附有利物质，因此使用时应慎重考虑，不能过量，一般用量为1%--5%。 返 第65页，共134页，编辑于2022年，星期一 7、植物生长调节物质 植物激素是指自然状态下植物体内合成，并从产生处运送到别处，对生长发育产生显著作用的微量（1毫克/升以下）有机物； 植物生长调节剂是指一些具有植物激素活性的人工合成的物质。 第66页，共134页，编辑于2022年，星期一 植 物 激 素 植 物 生 长 调 节 剂 在植物组织培养中使用的生长调节物质主要有生长素类和细胞分裂素类两大类，少数培养基中还添加赤霉素GA3等 植物生长 调节物质 第67页，共134页，编辑于2022年，星期一 种类　IAA　NAA　IBA　2,4－D 作用　诱导愈伤组织形成和根分化，促进细胞分裂和伸长生长。根对生长素最敏感，在极低浓度下(10.5-10.8mg／L)就可促进生长，其次是茎和芽。 浓度　0.05－5mg/L， (1)、生长素类(auxin) 植物生长调节物质——生长素 第68页，共134页，编辑于2022年，星期一 天然的生长素热稳定性差，高温高压或受光条件易被破坏。在植物体内也易受到体内酶的分解。组织培养中常用人工合成的生长素类物质。生长素配制可先用少量95％酒精助溶。 2，4-D可用0．1mol／L的NaOH或KOH助溶。生长素常配成1mg/ml的溶液贮于冰箱中备用。 植物生长调节物质——生长素 第69页，共134页，编辑于2022年，星期一 植物生长调节物质——生长素 IAA(吲哚乙酸) 是天然存在的生长素，亦可人工合成，其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小，高温高压易被破坏，也易被细胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。 NAA(萘乙酸) 在组织培养中的起动能力要比IAA高出3-4倍，且由于可大批量人工合成，耐高温高压，不易被分解破坏，所以应用较普遍。NAA和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。 第70页，共134页，编辑于2022年，星期一 植物生长调节物质——生长素 IBA(吲哚丁酸) 是促进发根能力较强的生长调节物质。 2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸) 起动能力比IAA高10倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量常有毒效应。 第71页，共134页，编辑于2022年，星期一 (2)、GA(赤霉素) 种类：有20多种，生理活性及作用的种类、部位、效应等各有不同。培养基中添加的是GA3。 作用：促茎伸长，促胚发育成植株；打破休眠； 特性：赤霉素溶于酒精，配制时可用少量95％酒精助溶。赤霉素不耐热，高压灭菌后将有70％-100％失效，应当采用过滤灭菌法加入。 植物生长调节物质——赤霉素 第72页