USP35NF3061非无菌制剂的微生物检查微生物计数.pptVIP

非无菌制剂的微生物检查：微生物计数 USP61培训专题 总述 计数培养基生长能力测试和方法适用性 产品检验 检验方法提供了在有氧条件下嗜常温菌和真菌的定量计数方法。 （该方法不适用于含活性微生物作为活性组分的产品） 如供试品具有抗菌活性，尽可能移除或中和。如使用灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。 如使用表面活性剂进行样品制备，应证明其对微生物无毒性及其与所用灭活剂的相容性。 总述 计数方法： 薄膜过滤法 平皿计数法 最大概率法（MPN）：用于检测极少数量的微生物，精密度、准确度差，不适合用于霉菌 倾注平板法 表面涂布法 back 计数培养基生长能力测试和方法适用性 生长能力测试 计数方法适用性 生长能力测试： 总则 菌液制备 阴性对照 培养基生长测试 结果判断 总则 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。 供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。 若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。 名词缩写解释 TAMC：Total Aerobic Microbial Count 总需氧微生物数 TYMC：Total Yeasts and Molds Count 霉菌酵母菌总数 TSA：大豆酪蛋白消化琼脂 TSB：大豆酪蛋白消化肉汤 SDA：萨布罗葡萄糖琼脂 SDB：萨布罗葡萄糖肉汤 PDA：马铃薯葡萄糖琼脂 试验菌株 试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干粉菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 试验菌株的种类： 白色念珠菌(ATCC 10231) 黑曲霉(ATCC 16404) 真菌 金黄色葡萄球菌（ATCC 6538) 铜绿假单胞菌(ATCC 9027) 枯草芽孢杆菌(ATCC 6633） 细菌 菌液制备 按表1规定程序培养各试验菌株。 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成适宜浓度的菌悬液； 如用于混悬黑曲霉芽孢，可在缓冲液中加入0.05%吐温80。制备好的悬浮液在2小时内使用，如存放在2℃-8℃则可延长至24小时内使用。 作为制备黑曲霉或枯草芽孢杆菌的营养菌体新鲜悬浮液后并稀释的一种替代方法，可制备稳定芽孢悬浮液并取一定体积的芽孢悬浮液用于试验接种。稳定的芽孢悬浮液可在有效期内存放于2℃-8℃。 阴性对照 为确认试验条件是否符合要求，应以稀释剂代替供试品进行阴性对照试验， 阴性对照试验应无菌生长。供试品检查时也需进行阴性对照试验。如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。 培养基生长测试 每一批成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应进行适用性检查。 按表1 所述，接种不多于100cfu的菌液到大豆酪蛋白消化肉汤和大豆酪蛋白消化琼脂或萨布罗葡萄糖琼脂，各自进行培养。 结果判断 对于固体培养基，测得的促生长作用与标准接种液的计算值相比，相差不得超过两倍。 对于新鲜配制的接种液，微生物的生长应与上一次检验并批准的培养基批次的结果相似。液体培养基若与上一次检验并批准的培养基批次的结果相似，可清晰地看见微生物的生长，亦认为是适宜的。 back 计数方法适用性 样品制备 接种与稀释 中和/去除抗菌活性 产品存在情况下的微生物的恢复生长 结果与解释 非脂质 脂质 不溶于水产品 气雾剂或喷雾剂 透皮贴剂 水溶性产品 一般可分 根据供试品得到理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超出1小时。 样品制备 水溶性产品：用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，pH7.2磷酸盐缓冲液或大豆酪蛋白消化培养基将供试品溶解或稀释（一般制备成1:10的稀释液）。必要时，调节pH值至6-8.如需进一步稀释则使用相同的稀释液。 不溶于水的的非脂质产品：用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，pH7.2磷酸盐缓冲液或大豆酪蛋白消化培养基将供试品溶解或稀释（一般制备成1:10的稀释液）。对于润湿性差的物质可加入表面活性剂，如1g/L吐温80助混。必要时，调节pH 值至6-8。如需进一步稀释则使用相同的稀释液。 脂质产品：用无菌十四烷酸异丙酯溶解，或将供试品与最少量并能使供试品乳化的无菌吐温80或其它非抑制性无菌的表面活性剂混合。小心混合，若需要可在水浴中进行，然后加入预热的稀释剂使成1∶10供试液，混合，并在最短时间内形成乳状液。必要时，用含适宜浓度的无菌吐温80或其他非抑制性无菌表面活性剂的稀释剂进一步10倍系列稀释。 气雾剂或喷雾剂：在