基础医学生化测量系统的校准南京.pptVIP

杂散光 1）在波长340nm，第一个试剂位放入蒸馏水，以蒸馏水为样本，重复测定5次吸光度值；第二个试剂位放入NaNO2溶液，以NaNO2溶液为样本，重复测定5次吸光度值；或将蒸馏水和NaNO2溶液分别加入同一比色杯读取吸光度（可消除比色杯误差），重复测定5次，共得5个蒸馏水和5个NaNO2溶液的吸光度。 2）最小NaNO2溶液吸光度-最大蒸馏水吸光度≥2.3。 复兴仪器的杂散光测定 复兴仪器的杂散光测定 复兴仪器的杂散光测定（空白） 吸光度正确度 指吸光度实际测定值与理论值之差，该偏差越小吸光度正确度越高，间接说明波长的正确度与杂散光的多少。 1）国家标准物质法 2）己糖激酶法 吸光度正确度 1）国家标准物质法： 使用国家标准物质研究中心制备的标准物质溶液，其吸光度分别为0.5和1.0。 在340nm波长、比色杯光径1cm时，以标准物质标示的参比液作参比，测吸光度值，重复测量3次。 计算3次测量值的算术平均值与标准值之差，0.5的标准液允许误差为±0.025， 1.0 的标准液，允许误差为±0.07。 测定结果 标准物质的吸光度：A1-1=0.489 A1-2=0.980 （不确定度：0.005） 检测结果： A1-1=0.4916；0.4836；0.4812，均值为0.4855 A1-2=0.9703；0.9714；0.9722，均值为0.9713 结果判定：A1-1误差±0.025；A1-2误差±0.07。即 0.464≤A1-1≤0.514；0.910≤A1-2≤1.050 吸光度正确度 2）己糖激酶法 用己糖激酶（HK）法测定葡萄糖浓度时，反应产生NADH，在340nm 测定吸光度，间接测NADH的ε（ε理论值为6220），以此为标准校正ε。 以HK测葡萄糖为例，试剂反应过程如下：　 HK 葡萄糖+ ATP------6-P-葡萄糖+ ADP, G6PDH 6-P-葡萄糖+ NAD+-------葡萄糖酸+NADH, 影响吸光度准确度的主要因素 杂散光多 波长不正确 标准液不正确 仪器的灵敏度或其他原因 吸光度重复性 1）以重铬酸钾标准溶液为样本，在波长340nm，吸光度为0.3～0.5,以蒸馏水为空白,试剂量为全自动生化分析仪标称的最小试剂量、测定时间为10min；每30秒读取吸光度,连续20次，得到20个吸光度值。计算CV，应≤1.0% 2）采用吸光度约为0.5生化分析仪用吸光度标准物质，在340nm处连续测定5次，然后计算其中最大值与最小值之差。吸光度的重复性均应不大于0.005 检测结果： A1-1=0.4828；0.4831；0.4836；0.4812；0.482 0.4836-0.4812=0.0024≤0.005 吸光度线性误差 分别用浓度为2.0、4.0、6.0、8.0、10.0g/L的氯化钴标准溶液，以蒸馏水为对照，在510nm（500-520nm）测定各溶液吸光度，连续测量3次，然后将所得数据求相关系数，r≥0.995。或按下列公式计算，线性误差符合规定要求。 分光装置 吸光度范围 线性误差（%） 棱镜或光栅 0.1-0.3 ±5 0.3-0.6 ±4 0.6-0.9 ±5 结论：符合吸光度线性要求 交叉污染率 概念：由测量系统将一个检测样品反应携带到另一个检测样品反应的分析物不连续量，由此错误地影响了另一个检测样品的表现量。 1、氯化钴方法 2、桔红G方法 3、临床标本的检测：50U/L与250U/L的AST或ALT测定 测定方法： 将氯化钴标准溶液按仪器规定的最小样品量，先用质量浓度为2.0g/L的氯化钴标准溶液将比色杯冲洗三次，接着对该溶液连续测量四次。按上述方法依次循环对2.0和10.0g/L氯化钴标准溶液重复测得七组在510nm处的测量值（四组低浓度值和三组高浓度值），然后按以下公式将每相邻两组值进行计算，得到三个低浓度到高浓度的计算值和三个高浓度到低浓度的计算值，即为交叉污染率，均应＜1.5%。 L1=0.1634；L2=0.1691；L3=0.1639；L4=0.1668 H1=0.8316；H2=0.8331；H3=0.8305 CoLH=(0.8317-0.8316)/(0.8317-0.1666)×100%=0% CoHL=(0.1634-0.1666)/(0.8317-0.1666)×100%=-0.4% 结论：交叉污染率符合要求 温度正确度 用分度值小于0.1℃专用