细菌内毒素检查结果准确性的影响因素.pptx

细菌内毒素检查结果 准确性的影响因素 ;1 鲎试剂质量及灵敏度标示值得的影响 鲎试剂的质量:抗干扰能力,稳定性; 鲎试剂灵敏度标示值的准确性 。 鲎试剂灵敏度的误差 是否用细菌内毒素国家标准品标定？ 标示值是否准确？;2 细菌内毒素标准品引起的误差 细菌内毒素标准品种类 细菌内毒素标准品效价误差 细菌内毒素标准品操作误差 细菌内毒素单位表示误差 细菌内毒素标准品的错误使用 ;1) 细菌内毒素标准品种类 细菌内毒素国际标准品 细菌内毒素国家标准品 细菌内毒素工作标准品 ;2) 细菌内毒素标准品效价误差 细菌内毒素国家标准品与细菌内毒素工作标准品之间或细菌内毒素工作标准品与细菌内毒素工作标准品之间的生物效价存在一定的误差,用不同细菌内毒素标准品复核同一批鲎试剂灵敏度时估计存在一定的误差。中国药典要求“当λc在0、5λ-2λ(包括0、5λ和2λ)时,方可用于细菌内毒素检查,并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。”试验结果只要在这合格范围内表示鲎试剂标示灵敏度准确。;3) 内毒素标准品操作误差;注意:①只能在安瓿的易折点上部开启内毒素,不能沿易折点开启,防止振荡过程中内毒素粘在封口膜上。 ②只能取1ml的细菌内毒素检查用水复溶细菌内毒素工作标准品。 ③若使用的为细菌内毒素国家标准品,可按其使用说明书中的方法将其稀释至规定浓度后分装保存。若为细菌内毒素工作标准品,为一次性使用。 ;4) 错误使用 有部分客户使用厂家生产的细菌内毒素来复核鲎试剂的灵敏度,这是一种错误行为,更有甚者使用厂家生产的细菌内毒素来交叉复核鲎试剂的灵敏度,这是一种严重错误行为。 ;3 实验器皿的影响 器皿的计量管理(校正) 器皿的选择标准 器皿的正确处理;1) 器皿的选择标准 鲎试验对器皿的要求:刻度准确;内表面光滑;易于清理。细菌内毒素检查实验不宜选用注射器,最好使用经过校正的刻度玻璃吸管或吸嘴。注射器刻度不精确,内壁磨沙面吸附内毒素,而且要特别注意注射器针头引入的铁离子对试验结果的干扰,故不宜选用注射器。; 假如用量不大,使用频率不高,建议大伙儿选用本公司提供的一次性耗材。无热原耗材是一种在此行业中被鉴定为无内毒素和β-葡聚糖污染的产品,其中包括, 无热原试管、无热原移液器吸头。这些产品能够给您的工作带来特别大方便,另外,当实验出现误差时可首先排除器皿方面的因素,特别快分析判断出误差原因。 ;2) 器皿的正确处理 2005年版《中国药品检验标准操作规范》278页——细菌内毒素检查法“实验准备”规定:“将被洗涤的玻璃器皿用洗涤剂和自来水洗净并烘干水分后,置洗液中浸泡4小时,取出将洗液沥干,用自来水将残余的洗液洗净,再用蒸;馏水冲洗干燥后置适宜的密闭金属容器中,迅速置烤箱中,除去玻璃器皿表面估计存在的外源性内毒素。” 应该特别注意,该规程明确规定最后冲洗玻璃器皿必须“用蒸馏水冲洗,禁用纯化水冲洗。”有的客户使用反渗透制备的纯化水冲洗试验用玻璃器皿,结果试验中所有的阳性对;照都为阴性,复核鲎试剂灵敏度时试验结果误差较大,这主要是由于纯化水和蒸馏水的质量不同所造成的。因纯化水中存在的阴阳离子经250℃高温干烤不能完全被破坏,这时不同的离子就产生对鲎试剂酶反应抑制或增强的反应,为了保证试验结果的准确性和检验报告的权威性,我们应该严格遵守操作规程,用多效蒸馏水冲洗鲎试验用玻璃器皿。;4 样品成份及理化性质的影响 β-葡聚糖样物质的影响 PH值的影响 金属离子和弱酸阴离子的影响 药物浓度的影响 ;1) β-葡聚糖样物质的影响 常见现象:假阳性。 鲎试剂的特异性系指在药品、生物制品和血液制品中鲎试剂能准确测出被测物质内毒素的能力,既不能造成样品内毒素的漏检,也不能将其它物质错判为内毒素。;目前我公司研究证明,已知能与鲎试剂发生反应的物质有细菌内毒素和β-葡聚糖,而内毒素反应曲线为S型特征曲线,β-葡聚糖反应曲线为经过0点的斜线。鲎试剂的特异性差的另一种表现,是将其它物质(如β-葡聚糖)判定为内毒素,错误将合格药品判为不合格,造成制药厂直截了当经济损失。;鲎试剂反应机理图;判断假阳性的方法: 1、特异性鲎试剂法; 2、定量反应曲线分析法; 3、家兔模拟试验法。;2) PH值对反应速度的影响 常见现象:样品阳性不成立。 鲎试剂与内毒素反应的最适宜pH在6、5-8、0;pH ≤3 或≥10时,酶活性受到抑制。;PH对反应速度的影响: 影响酶原的激活; 影响酶分子的构象,过高过低的PH会改变酶的活性中心的构象,或甚至改变整个酶分子的机构使其变性失活。; 故鲎试验时,供试品 pH 最好应预调和6、5-8、0 为好,必要时可用无内毒素的 HCl 或NaOH 稀溶液调节 pH 值。美国、日本药局方以及中国药典故2005版规定