临床免疫学和免疫检验2016讲义1.pdfVIP

免疫细胞功能检测技术 疫细胞是指参与机体免疫应答的细胞，大致可分为两类，一类能识别特异性抗原，一旦被激活则显示出 特异性应答的功能，主要指淋巴细胞群，包括T 细胞、B 细胞、NK 细胞、K 细胞等；另一类能捕获抗原，处 理抗原，以一定方式提呈给淋巴细胞或表现其他免疫功能，包括中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。 淋巴细胞的功能检测 淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。 体内试验主要是进行迟发型超敏反应； 体外试验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝 原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞 产 物的测定。 一、T 细胞功能检测 T 细胞具有多种免疫生物学功能，如直接 靶细胞、辅助或抑制B 细胞产生抗体，对特异性抗原或丝 裂原刺激产生增殖反应及产生各种细胞因子。 T 细胞增殖试验 体外刺激T 细胞增殖反应的刺激物包括植物血凝素（PHA）、刀豆素A （ConA）和美洲商陆（PWM）、白 喉类毒素、破伤风类毒素、纯化蛋白衍生物（PPD）和白色念珠菌等。 非特异性增殖 -丝裂原：PHA、ConA、PWM 特异性增殖 -抗原：破伤风类毒素、PPD、白色念珠菌 T 细胞增殖试验 形态学检查法：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层 应用。缺点是 依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受 因素影响，重复性和准确性较差。 3 3 H-TdR 掺入法（最标准）：H-TdR 掺入法敏感性高，客观性强，重复性好，但需一定设备条件，同时 还存在放射性核素污染问题。 3 MTT 比色法（最常用）：本方法的敏感性虽不及 H-TdR 掺入法，但操作简便，无放射性污染。 T 细胞 功能测定 体外培养的T 细胞经各种丝裂原或抗原刺激后， 各种细胞因子，可借助免疫学、细胞生物学及分 子生物学技术分别检测细胞因子的含量、生物学活性和 表达水平，以反映T 细胞功能。 T 细胞介导的细胞毒试验 T 细胞介导的细胞毒试验时细胞毒性T 细胞（CTL）的特征，凡致敏T 细胞再次遇相应白细胞抗原，可 表现出破坏和溶解包细胞，他使评价机体细胞免疫水平的一种常用指标。该试验原则是选用适当的靶细胞 （常用可传代的已建株的人肿瘤细胞如人肝癌、食管癌、胃癌等细胞株），经培养后制成一定浓度的细胞 悬液，按一定比例与待检的淋巴细胞混合，共温育一定时间，观察肿瘤细胞 的情况。 该试验是评价机体细胞免疫水平的一种常用指标，特别是测定肿瘤患者CTL 肿瘤细胞的能力，常 作为判断预后和观察疗效的指标之一。 形态学方法 51Cr 法 细胞增殖评价法（MTT 法、3H-TdR 掺入法等） 体内试验 1.特异性抗原皮肤试验 常用的特异性抗原皮肤试验为结核菌素皮肤试验。 2.PHA 皮肤试验。 二、B 细胞功能检测 B 细胞增殖试验 溶血空斑试验 酶联免疫斑点试验 体内试验 B 细胞增殖试验 原理与T 细胞增殖试验相同，但刺激物不同，小鼠B 细胞可用细菌脂多糖（LPS）作为刺激物，人则用 含SPA 的金黄色葡萄球菌菌体及抗IgM 抗体等刺激。 溶血空斑试验 。空斑大小表示抗体形成细胞产生抗体的多少。 经典溶血空斑（SRBC 作为免疫原）：用于检测实验动物抗体形成细胞的功能。可分为直接法和间接法。 溶血空斑（SRBC 吸附其他抗原）：是指抗体形成细胞产生的Ig 与SRBC 上的抗原结合，在补体参 与下出现溶血反应。方法是将吸附有已知抗原的SRBC、待检B 细胞、补体及适量琼脂糖液混。 酶联免疫斑点试验（ELISPOT） 1.原理 酶联免疫斑点试验（ELISPOT）是一种既可检测抗体 细胞，又可检测抗体 量的方法。 其原理是用抗原包被固相载体，加入待检的抗体产生细胞，即可诱导抗体的 。 的抗体与包被抗原 结合，在抗体 细胞周围形成抗原抗体复合物，使细胞吸附于载体上，加入酶标记的第二抗体与细胞上 的抗体结合，通过底物显色反应的深浅，可测定出生成的抗体量，