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远端缺血预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤后血脊髓屏障的保护作用及相关机制研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：远端缺血预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤后血脊髓屏障的保护作用及相关机制研究 1 1 材料与方法 2 2 结果 6 3 讨论 7 文2：银杏叶提取物对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用 8 1 材料和方法 10 2 结果 12 3 讨论 14 参考文摘引言： 15 原创性声明（模板） 17 文章致谢（模板） 17 正文 远端缺血预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤后血脊髓屏障的保护作用及相关机制研究 文1：远端缺血预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤后血脊髓屏障的保护作用及相关机制研究 在临床上，胸腹主动脉瘤修复术可导致脊髓缺血再灌注损伤（spinal cord ischemia reperfusion injury，SCIRI），而脊髓损伤后一个灾难性的、不可预知的并发症是截瘫[1]。目前，针对如何有效避免胸腹主动脉瘤修复术后SCIRI的发生，大量的临床及实验研究工作已经开展，然而，截瘫的发生仍不可完全避免。因此，需要探索更加有效的方法保护脊髓免受缺血再灌注损伤。 SCIRI的发生机制主要包括氧自由基介导的脂质过氧化作用、细胞内钙超载、兴奋性氨基酸的释放、炎性反应及细胞凋亡等。其中，血-脊髓屏障（blood-spinal cord barrier，BSCB）的破坏是SCIRI的一个重要的病理改变，在SCIRI的发生发展中发挥重要的作用[2-3]。BSCB是血液循环和脊髓组织之间的生理和代谢物质扩散的屏障，严格地调控着脊髓微环境的稳态，因此早期修复BSCB对于防治脊髓损伤具有十分重要的意义。研究表明，远端缺血预处理（remote ischemic preconditioning，RIPC）可对心脏、脑、肾脏等多种器官或组织缺血再灌注损伤产生保护作用[4]，同时，RIPC对SCIRI的保护作用也在一些动物实验中得到了验证[5]，然而，其内在的保护机制仍不十分清楚。之前的研究发现，热休克蛋白、内源性大麻素、活性氧物质触发的抗氧化通路介导了RIPC对脊髓缺血的耐受[5-7]，但关于RIPC对SCIRI后BSCB的影响还未见文献报道。因此，本研究旨在探讨RIPC对SCIRI后BSCB可能的保护作用及其机制，从而进一步揭示RIPC防治SCIRI的内在机制。 1 材料与方法 实验动物来源及分组 本实验共纳入36只日本大耳白兔，体重～ kg，雄性，购自武汉生物制品研究所（动物质量合格证号：），按照美国国立卫生研究院制订的实验室动物维护、使用指导意见和要求处理动物。每只动物都在各自单独的笼中饲养，环境温度及湿度均适宜，光暗周期为12 h/12 h，可自由摄入食物和水。麻醉前，所有动物的神经功能均完好。采用随机数字表法将动物均分为三组，每组12只：假手术组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）和远端缺血预处理组（R组）。于术后24 h处死，其中6只用于BSCB通透性检测，另外6只用于神经功能评价及claudin-5、occludin、BDNF（mRNA）蛋白检测。 SCIRI模型的建立 经日本大耳白兔耳缘静脉注入3%戊巴比妥钠 mL/kg麻醉动物，取仰卧位固定，保留其自主呼吸。经耳缘静脉留置针输注乳酸林格液4 mL/（kg·h），间断静脉注射戊巴比妥钠维持麻醉。经右侧股动脉置管以持续监测股动脉压和心电图，保持血流动力学稳定。加热毯维持直肠温度为（±）℃。I/R组和R组采用改良的Zivin法[8]创建SCIRI模型：取腹部正中切口，暴露分离腹主动脉，于左肾动脉根部下方 cm处，以无损伤动脉夹夹闭腹主动脉，阻断时以股动脉压力波形消失，远端平均动脉压为0 mmHg为准，40 min后开放动脉夹，开放时以股动脉压力波形恢复为准。阻断腹主动脉血流前5 min，经耳缘静脉注入肝素150 U/kg预防血栓形成。术毕肌注庆大霉素80 000 U预防感染，逐层缝合皮肤，待动物清醒后归笼饲养观察。S组仅开腹并暴露分离腹主动脉，不阻断其血流，40 min后关腹。 R组干预方法 SCIRI模型建立前1 h，暴露分离双侧股动脉，采用无损伤动脉夹对双侧股动脉进行2个循环的10 min缺血/10 min再灌注处理。 神经运动功能评定 所有动物由一名未参与实验分组的课题组人员对兔后肢运动功能进行评分。评分采用改良的Tarlov评分标准[9]：0分，后肢完全瘫痪，没有可觉察的活动；1分，有可觉察的关节自主活动；2分，后肢可自由活动，但不能站立；3分，可站立但无法行走；4分，后肢功能完全恢复，能正常行走。　　 BSCB通透性检测 通过定量和定位分析脊髓组织中伊文思蓝（Eva blue，EB