一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒发明专利.pdfVIP

一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒 技术领域 本发明涉及一种病毒检测试剂盒，具体涉及一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒。 背景技术 冠状病毒是自然界广泛存在的一大类病毒，为线性单股正链的RNA 病毒，是许 多家畜、宠物包括人类疾病的重要病原，可引起多种呼吸道、肠道疾病，如MERS 和SARS 等冠状病毒更会并引起严重的呼吸道疾病。2020 年初爆发的新型冠状病毒 2019-nCoV 7 （ ）即属于冠状病毒科冠状病毒属，是目前已知的第 种可以感染人的冠 状病毒。其病症被命名为COVID-19。 病毒都有其独特的基因序列，通过检测病人体内的病毒核酸，就可判断病人体内 是否存在病毒。而人体内的病毒可能会随着患者的康复而消失，因此核酸检测是临床 上判断患者是否感染与治愈的重要指标。因此，针对新型冠状病毒的快速检测是有效 判断感染人群，预防病毒再次传播的重要手段，对于临床早发现、早诊断、早隔离、 早治疗都至关重要，能做到有效防控新冠肺炎疫情。 PCR qPCR qPCR 目前，病毒核酸检测方法通常是采用荧光定量 法 （ ）。 即以病 毒独特的基因序列为检测靶标，针对特定的基因序列设计特异性的寡核苷酸探针，并 在其两侧分别添加荧光发光基团和猝灭基团。在扩增中，靶基因呈指数级增加，而 DNA 聚合酶利用核酸外切酶活性降解荧光探针，从而产生特定波长的荧光信号。目 N E ORF1ab 前的病毒检测试剂盒大多选择病毒的 基因、 基因、 基因序列作为靶基因， E E N N ORF1ab 基因编码病毒包膜蛋白 ， 基因编码病毒核衣壳蛋白 ， 基因编码多聚 蛋白pp1ab。若样本中存在靶基因，则扩增出来的片段越多，累积得到的荧光信号就 越强。而没有病毒的样本中，由于没有靶基因扩增，因此就检测不到荧光信号增强。 但核酸检测的准确与否，与多种因素有关，同一病人的不同检测样本，其检测结 果也可能存在较大差别。此外，随着病程的变化，病人体内的病毒量也在动态变化。 因此，开发高效灵敏的试剂盒是快速检测关键因素。 发明内容 本发明的目的在于提供一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒，通过特异性的引物及 荧光探针，检测标本中是否存在ORF1ab基因，以此判断被检人是否患有COVID-19。 本发明所述新型冠状病毒核酸检测试剂盒，包括用于扩增新型冠状病毒ORF1ab 基因的核酸扩增试剂、对照品和超纯水。 所述核酸扩增试剂包括SEQ NO.1~2 所示的引物和SEQ NO.3 所示的探针混合 液。 pH8.5 20mMTris-HCl 40mM KCl 0.3%TritonX-100 所述反应液的组成为： 、 ， ， ， 4mMMgCl 10%DMSO 0.4mMdATP 0.4mMdCTP 0.4mMdGTP 0.4mMdUTP 2， ， ， ， ， ， 0.2mMdTTP 2M 0.04U/μL UDG 0.075U/μLTaq 0.05 U/μL ， 甜菜碱， 酶， 酶， 逆转 1μM Random primer 1μM 录酶， ， 。 SEQ IDNO.1 SEQ IDNO.2 SEQ IDNO.3 所