一种检测呼吸道病原的核酸的试剂盒、检测方法及应用发明专利.pdfVIP

一种检测呼吸道病原的核酸的试剂盒、检测方法及应用 技术领域 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测呼吸道病原的核酸的试剂盒、 检测方法及应用。 背景技术 COVID-19 案例很快出现在世界各国，并被世界卫生组织 （World HealthOrganization WHO ， ）宣布为世界性的公共卫生威胁。虽然目前报道 COVID-19 4-5 14 的中位发作时间为 天，但有一小部分感染者是在 天隔离之后 才出现症状。COVID-19 最常见的症状是咳嗽和发烧。不过，也有一定比例的病 X CT COVID-19 人并不呈现症状，包括 光检测及 检测。 出现症状时间的不确定 以及无症状感染的情况给疾病的早期精准检测带来了极大障碍，因而也使得疾病 防控极具挑战。这使得COVID-19病原核酸的分子检测变得尤为重要。 COVID-19 β 引起 的病原已经被确认为是 属冠状病毒，被命名为 SARS-CoV-2。和其他冠状病毒类似，SARS-CoV-2 是单链、正义的RNA 病毒。 SARS-CoV-2 SARS-CoV MERS-CoV 和 以及中东呼吸综合症冠状病毒 （ ）分别 79% 50% COVID-19 具有 和 的核酸相似性。针对 的现有分子诊断方法主要是基 PCR RT-PCR SARS-CoV-2 E N ORF1ab 于反转录 （ ）。 的 、 以及 基因是常用 的RT-PCR 的靶标基因。高通量的RT-PCR平台也已被研发出来用于大规模的 诊断。不过，RT-PCR通常依赖于特别的、大型的仪器，因此大规模的RT-PCR 检测往往局限于在医院的病人。 最 近 研 究 表 明 ， Clustered Regularly Interspaced Short PalindromicrRepeats CRISPR （ ）技术可用于病原的低成本、便携式的分子检 CRISPR CRISPR-associatedgenes Cas 测。 以及 （ ）基因是细菌抵御外源病毒 感染的免疫系统。CRISPR 的模块特性使得此技术被广泛应用于基因组工程中。 基于CRISPR 的病原核酸的分子诊断依赖于Cas核酸酶的RNA 或DNA 的靶向 活性。同时，不同CRISPR系统可以组合实现对病原的多重检测。在最近中国 爆发的非洲猪瘟疫情中，很多基于CRISPR-Cas12a 的诊断平台被开发出来。 目前作为新发传染病的新型冠状病毒，其亚基因组表达谱尚未被清晰阐明， 各个基因的表达情况以及各个基因片段对扩增及CRISPR-Cas 检测的敏感性也 不清楚，能否设计出针对新型冠状病毒、甲型流感病毒以及乙型流感病毒等呼吸 道病原的且特异性高、无交叉反应的检测方法等本身目前仍然是未被阐明的科学 问题。目前检测新型冠状病毒时所使用的传统RT-qPCR方法较容易误检，且不 太容易区分新型冠状病毒和其他流感如甲型流感病毒和乙型流感病毒的区别，这 三种在临床表现上的症状是十分相似的，而实际应用时也发生了将新冠误诊为流 Kong et al.,2020, Nat Microbiol CRISPR-Cas12a 感的案例 （ ）。此外，基于