演示文稿超低温冷冻保存种质.pptVIP

化冻操作 a、快速解冻法 指将液氮中保存的材料直接投入到37—40℃温水浴中进行解冻的方法。解冻的升温速度为500—750℃/min。 b、慢速解冻法 将液氮中保存的材料先置于0℃低温下解冻，再逐渐升至室温下进行解冻的方法。 当前26页，共31页，星期日。 第二十六页，共三十一页。 化冻材料的活力检测 检验化冻后材料的生活力和存活率的最根本方法是再培养。 FDA、TTC等染色的方法进行快速检测，只能作为生活力的预测指标 当前27页，共31页，星期日。 第二十七页，共三十一页。 当前28页，共31页，星期日。 第二十八页，共三十一页。 1973年科学家首次成功地超低温保存了 胡萝卜悬浮细胞。 1993年，英国国家种质库采用超低温保存离体的苹果种质进行再培养成功。 超低温保存技术的发展 当前29页，共31页，星期日。 第二十九页，共三十一页。 超低温保存种质技术的应用前景 悬浮细胞和愈伤组织的保存 生长点冷冻保存 胚状体（体细胞胚、花粉胚）冷冻保存 原生质体冷冻保存 当前30页，共31页，星期日。 第三十页，共三十一页。 小结 生物细胞的低温冻存是防止生物种质灭绝的重要途径 低温冻存技术的应用取决于冻存技术和在培养技术的成熟程度 根据细胞类型选择冻存和解冻方法是再培养成功的前提 当前31页，共31页，星期日。 第三十一页，共三十一页。 各种不同的品种在培育过程中，就要用不同的品种来杂交，如果我们连用于杂交的品种都丧失了，那杂交就没材料了。因此，种质资源是物种进化和植物育种工作的基础，也是人类赖以生存的基本条件之一。比如袁隆平的杂交水稻就是利用野败的野生稻进行杂交，多养活五千万人 * 2、非原生境保存：将植物的遗传材料保存在不是它们的自然生境的地方。我们一会儿会专门介绍，我们先说一下什么是原生境保存 * 所谓的原生境保存 就是将植物的遗传材料保存在它们的自然环境中。原生境保存的地方多是植物保护区，另一种方法为农田种植保存。巴西亚马逊热带雨林正以每分钟六个足球场的速度消失，十分惊人 * 珍宝岛国家级自然保护区 * 这是我在北京参观北京植物园时拍的照片，每一种植物上面都有对植物介绍的牌子 * 这个图是农田种植保存。美国、马里兰、农田 * * 这些常见的种质保存方法都可以先经过抑制外植体生长的离体保存方法来进行处理，我们具体看一下抑制外植体生长的离体保存方法有哪些 * 1种质外植体在非冻结的低温下，老化速度减慢，因此可以使继代间隔时间延长2还可以用矿物油覆盖也可以达到降低环境中氧含量的目的3可以使玉米小麦水稻等减缓生长。4降低基本培养基中的营养成分，加入高渗物质等 * 种子保存是传统的种质保存方法，也是传统的种质资源保存的主要方式 * 种植保存包括在自然生态环境下，通过建立自然保护区和天然公园等，就地保存自我繁殖的种质；也可通过植物园和种质资源圃等将植物种植在原产地以外的地方。属于原生境保存的主要方式。右下角就是美丽的华南植物园 * 离体保存是将植物外植体在无菌的环境中进行组织培养保存。就是我们前面章节所讲授的内容 * 极端低温温度下，活细胞内的物质代谢和生长活动几乎完全停止。因此，细胞、组织和器官在超低温保存过程中不会引起遗传性状的改变，也不会丢失形态发生的潜能。同时，由于超低温条件下，生物的代谢和衰老过程大大减慢，甚至完全停止，因此可以长期保存植物材料。 * 防止资源灭绝、节约人力物力、便于交流。可以在有限空间内保存大量资源。与种子保存相比，可以不受时间和高含水量的限制。与试管苗相比，也就是与离体保存相比，可以避免频繁继代而带来的变异。唯一的缺点就是操作复杂，技术要求高 * 这也是超低温冰冻保存的一个基本步骤 * 植物材料的种类、基因型、年龄、生理状态、抗寒性和形态结构等都对冷冻保存效果有很大影响。一般细胞分裂旺盛、体积小而原生质浓厚的分生细胞或组织比体积大而高度液泡化的细胞有利于超低温保存。 * 目的是减少细胞自由水的含量，使细胞经受低温锻炼，以有效提高组织或细胞的抗冻能力。在冰冻保存前的预培养时，在培养基中加入冰冻保护剂，最常用的是蔗糖。还可以将选好的材料在低温下锻炼数天，就有可能大大提高液氮保存的存活率。 * 前冰冻保护剂的预处理对于超低温冷冻保存有重要意义。合理选择和使用冰冻保护剂对超低温保存材料的存活率和再生能力是至关重要的。最后甘油甘露醇脯氨酸蔗糖甘露糖醇二甲亚砜（DMSO）都是常见的冰冻防护剂 * 这类物质可以增加细胞膜的通透性，极易渗入细胞内部，加速细胞内的水流到细胞外结冰，在溶液中可以产生强烈的水合作用，降低冰晶的形成和增长速度，稳定细胞膜结构，减少冰冻对细胞的有害影响，进而保护细胞免受冻害 * 2保护剂应当缓慢加入。主要是为了防止对细胞的渗透冲击，如果使用甘油加入速度需更慢