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DNA-DNA 双链DNA热处理变性解链----变性后冷处理---复性---不同株的或同源性的DNA杂交组成双链 DNA-RNA 当非配对碱基超过10-20% DNA-DNA之间就不能形成双链,限制了DNA-DNA杂交的应用水平,若比较亲缘关系较远的菌株,就用DNA-RNA, DNA-DNA杂交率很低时, DNA-RNA仍有较高的杂交率,可比较属与属之间的或较远的 核酸探针:指能识别特异核苷酸序列的、带标记的一段单链DNA或RNA分子,即是能与特定的核苷酸序列(靶序列) 结合,而不与其他序列结合的带标记的单个核苷酸片段。 系统发育树探针 全rRNA探针 科属的特异性探针 第31页,共51页,编辑于2022年,星期日 染色体的原位杂交 染色体的原位杂交 荧光探针杂交 第32页,共51页,编辑于2022年,星期日 第33页,共51页,编辑于2022年,星期日 遗传重组 原核生物中,虽然没有有性生殖,但它们可以通过转化、转导和接合作用进行染色体基因的交换 发生接合、转化和普遍性转导的细菌之间需要存在广泛的染色体同源性,否则此类重组(同源重组)即不能发生 质粒及转座子的基因转移在细菌分类中的意义也是值得注意的 基因的垂直转移 和水平转移 第34页,共51页,编辑于2022年,星期日 第四节 微生物的快速鉴定和自动化分析技术 一、微量多项试验鉴定系统 原理:根据微生物生理生化特征鉴定的结果,而进行的数码分类鉴定 国外的产品已标准化、系统化和商品化,主要有法国生物-梅里埃集团的API/ATB;瑞士罗氏公司的Micro-ID,Enterotube,Minitek;美国的Biolog全自动和手动细菌鉴定系统 优点:快速、敏感、准确、重复性好,简易,节省人力、物力、时间和空间 广泛应用于动植物检疫、临床检验、食品卫生、药品检验、环境监测、发酵控制和生态研究。 第35页,共51页,编辑于2022年,星期日 “API”细菌数值鉴定系统 API由bioMerieux(生物-梅里埃公司,法国)依据20,000多株标准菌株,大约1000种不同细菌生化试验于1970年开始开发的系列产品。 它的出现是对细菌学领域传统技术的一次标准化、微量化的彻底变革。它使细菌鉴定更加简单、快速和可靠,已被微生物学家的广泛使用,并成为全球的鉴定细菌的参考标准。 API创建了独特的数值鉴定法,并设计了相应的计算机软件APILAB plus。它较API鉴定检索书更为高效、可靠、全面、详尽、方便, 故APILAB Plus能够鉴定很多非典型菌。该软件做为一种判断结果的工具,只要键入生化反应结果的数值编码,就可立刻获得鉴定报告结果。 第36页,共51页,编辑于2022年,星期日 API 10 S???? 最常见革兰氏阴性杆菌API NH?????? 奈瑟民菌、嗜血杆菌属API 20 STREP 链球菌及有关菌API CAMPY??? 弯曲杆菌API CORYNE?? 棒状菌群MI LISTERIA? 李斯特菌属API 20E????? 革兰氏阴性杆菌(肠杆菌科)API 2ONE????? 菲肠道革兰民阴性杆菌API 2OA?????? 厌氧菌API 20C AUX?? 酵由菌API STAPH??? 葡萄球菌和微琼菌…… API已包括15个鉴定系列,700多个细菌种: 第37页,共51页,编辑于2022年,星期日 API20E反应判定表 第38页,共51页,编辑于2022年,星期日 API 20E鉴定卡示意图 第39页,共51页,编辑于2022年,星期日 关于微生物的进化系统发育分类 (2) 第1页,共51页,编辑于2022年,星期日 第一节 进化的测量指征 高等动植物判断亲缘关系:形态结构、生理生化、行为习性等表型特征,少量的化石资料 微生物:形体微小、结构简单、缺少有性繁殖过程,依靠表型特征无法测量其系统发育 进化指征的选择: 微生物的系统发育,主要是分析和比较生物大分子的结构特征,特别是蛋白质、RNA和DNA这些反映生物基因组特征的分子序列,作为判断各类微生物乃至所有生物进化关系的主要指征 蛋白质、RNA和DNA序列进化变化的显著特点是进化速率相对恒定 第2页,共51页,编辑于2022年,星期日 合适的指征大分子 1、必须普遍存在于所研究的各个生物类群中 2、在各种生物中功能同源的大分子 3、为了鉴定大分子序列的同源位置或同源区,要求所选择的分子序列必须能严格线性排列,以便进行进一步的分析比较 4、根据所比较的各类生物之间的进化距离来选择适当的分子序列 (选择进化速率低的分子序列) 第3页,共51页,编辑于2022年,星期日 1、rRNA参予生物蛋白质的合成过程,其功能是任何生物都必不可少的,而且在生物进化的漫
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