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复方氨基酸注射液20AA中焦谷氨酸和醋酸根使用HPLC法测定结果分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：复方氨基酸注射液20AA中焦谷氨酸和醋酸根使用HPLC法测定结果分析 1 1、仪器与试药 2 2、方法与结果 3 0回收率试验 5 1样品测定 6 3、讨论 6 文2：HPLC法测定大鼠脑组织游离天门冬氨酸谷氨酸肌肽及γ氨基丁酸 7 2 方法与结果 9 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 13 正文 复方氨基酸注射液20AA中焦谷氨酸和醋酸根使用HPLC法测定结果分析 文1：复方氨基酸注射液20AA中焦谷氨酸和醋酸根使用HPLC法测定结果分析 复方氨基酸注射液（20AA）是由20种L-氨基酸配制而成的无菌复方制剂，临床上作为全肠外营养系统的一部分用于预防和治疗肝性脑病，可满足肝功能衰竭状态下的特殊代谢需要，并用于肝病或肝性脑病急性期的静脉营养以及其他原因引起的营养不良的肠道外营养治疗。复方氨基酸注射液（20AA）中氨基酸总量占比为10%，富含精氨酸、门冬氨酸、谷氨酸、鸟氨酸等多种降氨组分，可以纠正氨中毒，在供给充分营养的同时有效预防各种肝性脑病。其中谷氨酸含量高达 mg/mL。谷氨酸在高温灭菌和储存过程中易发生脱水缩合反应，降解形成焦谷氨酸[1]。焦谷氨酸在体内能够结合谷氨酸受体，抑制谷氨酸的摄取，对人体中枢神经系统产生不良影响[2]。焦谷氨酸还会导致机体产生阴离子间隙增高的代谢性酸中毒[3]。复方氨基酸注射液（20AA）中醋酸根主要来源于原料醋酸赖氨酸，同时调节制剂p H值也可能引入醋酸根。醋酸根含量的高低会影响终产品的pH值，而p H值对产品的稳定性起着至关重要的作用。研究表明，谷氨酸的稳定性与温度、p H值的变化直接相关，在p H值小于侧链的p Ka值（p Ka=）时，谷氨酸的稳定性降低，更易降解产生焦谷氨酸[4]。因此，醋酸根的含量与焦谷氨酸的形成也存在潜在的相关性。关于焦谷氨酸的HPLC分析方法多集中于味精、咖啡、血浆以及人角质层等样本的测定[5，6，7，8]。醋酸根的检测方法主要包括气相色谱法、HPLC法、离子色谱法、滴定法等[9，10，11，12]。为了进一步提高产品的分析检测效率，本研究采用HPLC法同时测定复方氨基酸注射液（20AA）中焦谷氨酸和醋酸根，为复方氨基酸类制剂质量标准的提高和完善提供实验依据。 1、仪器与试药 Wate e2695高效液相色谱仪，Wate2489UV/VIS检测器，Empower 色谱工作站；Mettler Toledo XS205型十万分之一电子天平。 焦谷氨酸（批号140763-201602，质量分数%）、无水醋酸钠（批号100735-201502，质量分数%）、异亮氨酸（批号140683-201302，质量分数%）、酪氨酸（批号140609-201513，质量分数%）对照品均购自中国食品药品检定研究院；复方氨基酸注射液由德国贝朗医疗股份公司提供，规格500 m L∶50 g，批号、、；乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯；实验用水为超纯水。 2、方法与结果 色谱条件 GL Sciences Inertsil ODS-3色谱柱（250mm× mm，5μm）；流动相A:5mmol/L磷酸溶液（磷酸调p H ），流动相B：乙腈–流动相A(80∶20），采用梯度洗脱（0～15 min，0%B;15～20 min，0%→100%B;20～24 min，100%B;24～25 min，100%→0%B;25～40 min，0%B）；检测波长：210 nm；体积流量： mL/min；柱温：25℃；进样量：15μL。 溶液的配制 精密量取复方氨基酸注射液（20AA)3 mL，置25 mL量瓶中，用5 mmol/L磷酸溶液（磷酸调p H ）稀释并加至刻度，摇匀，即得。 分别取无水醋酸钠、焦谷氨酸对照品各适量，精密称定，加5 mmol/L磷酸溶液（磷酸调p H ）溶解，并稀释制成约含醋酸钠525μg/mL、焦谷氨酸100μg/mL的对照品溶液，即得。 按处方量精密称取原辅料（除醋酸赖氨酸、谷氨酸外），配制成与供试品溶液相同质量浓度的溶液，作为阴性样品溶液。 分别取无水醋酸钠、焦谷氨酸、异亮氨酸和酪氨酸对照品各适量，用5 mmol/L磷酸溶液（磷酸调p H ）溶解并稀释制成约含醋酸钠525μg/mL、焦谷氨酸100μg/mL、异亮氨酸600μg/mL、酪氨酸25μg/mL的混合溶液，作为系统适用性溶液。 系统适应性试验 取系统适用性溶液，进样测定，记录色谱图，结果见图1。醋酸根与异亮氨酸、焦谷氨酸与酪氨酸的分离度均大于，符合要求。焦谷氨酸、醋酸根的理论板数分别为1