分子生物学问答.docxVIP

1.简述 PCR 与 DNA 复制的异同点 区别： DNA复制 PCR技术 解旋方式 解旋酶催化 DNA 在高温作用下变性解旋 场所 细胞内（主要在细胞核） 细胞外（主要在 PCR 扩增仪内） 酶 DNA 解旋酶、普通的 DNA 聚合酶等 耐高温的 DNA 聚合酶（Taq 酶） 温度条件 细胞内温和条件 需控制温度，在较高温度下进行 合成的对象 DNA 分子 DNA 片段或基因 联系： ① 模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成 ② 原料：均为四种脱氧核苷酸 ③ 酶：均需要 DNA 聚合酶进行催化 ④ 引物：均需要引物，使 DNA 聚合酶从引物的 3’端开始连接脱氧核苷酸 2.核酶（催化活性的RNA）类型2-3种举例及其主要功能 （1）剪切型核酶 ： 自身催化剪切型RNA：锤头核酶 发夹核酶 丁型肝炎病毒（HDV）核酶 异体催化剪切型RNA：核糖核酸酶P（RNaseP） RNaseP功能：核糖核蛋白体复合物，能剪切所有tRNA前体的5‘端，除去多余的序列，形成3’-OH和5’-磷酸末端。 其作用机制： 只剪不接，催化自身RNA或不同的RNA分子，切下特异的核苷酸序列 剪接型核酶： I内含子 II内含子 其作用机制：通过既剪又接的的方式除去内含子 （2）DNA 拓扑异构酶， 功能：DNA拓扑异构酶在DNA解链时在将要打结或已打结处作切口。下游的DNA穿越切口并作一定程度的旋转，把结打开或解松，然后旋转复位连结。这样解链就不因打结的阻绊而继续下去。即使出现打结现象，双链的局部打开，也会导致DNA超螺旋的其他部分过度拧转，形成正超螺旋。拓扑酶通过切断、旋转和再连接的作用，实现DNA超螺旋的转型，即把正超螺旋变成负超螺旋。 （3）DNA多聚酶 功能 DNA合成 3.真核和原核生物信使RNA分子结构特点的异同 从分子结构上来看，真核生物和原核生物的mRNA是完全一样的，都是核糖核酸，由四种核糖核苷酸组成，并且都是由基因转录而来。 但两者有很多区别，如下： （1）原核生物mRNA常以多顺反子的形式存在。真核生物mRNA一般以单顺反子的形式存在。 （2）原核生物mRNA的转录与翻译一般是偶联的，真核生物转录的mRNA前体则需经转录后加工，加工为成熟的mRNA与蛋白质结合生成信息体后才开始工作。 （3）原核生物mRNA半寿期很短，一般为几分钟。真核生物mRNA的半寿期较长，有的可达数日。 （4）原核与真核生物mRNA的结构特点也不同。真核生物mRNA由5′端帽子结构、5′端不翻译区、翻译区、3′端不翻译区和3′端聚腺苷酸尾巴组成，原核生物mRNA无5′端帽子结构和3′端聚腺苷酸尾巴。 4.端粒酶组成端粒DNA分子的复制过程 端粒酶与染色体 DNA 末端 3’单链区域结合（5’端缩短后，留下 3’游离的单链末端，端粒酶中 RNA 与 DNA 配对，并以 CCCCAA 序列为模板，以 DNA 的 3’-OH 为引 物，完成 GGGGTT 一个重复单位的延伸后，端粒酶沿 DNA 链向 3’端移动，再次启动下 一个单位的复制。如此循环多次后，一条具有数十次重复的 cDNA 端粒末端合成，3’单 链自行回折，并在 G-G 之间连接，最后与 5’端结合，不仅避免了 5’端缩短问题，并且形 成封闭的 DNA 末端，保证了染色体结构的稳定。 5.DNA甲基化调控基因表达的特点 在高等生物中，DNA的甲基化会抑制转录，而转录的DNA通常是非甲基化的。DNA的甲基化与组蛋白的去乙酰化有关，与甲基化CpG序列结合的蛋白和组蛋白去乙酰化酶等蛋白因子一道形成复合体，换句话说，甲基化的CpG序列可招募组蛋白去乙酰化酶，去除组蛋白上的乙酰基团，抑制基因的表达。 6.断裂基因（间隔基因）及间隔基因存在的生物学意义： 真核生物的结构基因是由若干外显子和内含子间隔排列的序列组成的间隔基因。 生物学意义：有利于生物遗传的相对稳定；增加变异概率，有利于生物的进化；扩大生物体的遗传信息储量；利用内含子进行代谢调节。 7.原核生物和真核生物基因表达调控的异同 相似；以转录水平调控为主 Trans F + Cis F.→Gene on /off 相异；真核生物染色质的状态对基因表达的调控以 positive control 为主 m5C 与基因表达的相关 转录后多种方式的加工调节 个体发育的阶段调控 原核生物和真核生物基因表达调控的异同 原核生物 真核生物 操纵元调控 多样化调控，更为复杂。表达调控环节多 基因组小，大肠杆菌：总长 4.6×106bp, 编码 4288 个基因, 每个基因约 1100bp。 基因组大，人类基因组全长 3×109 bp，编码 10 万个基因，其