探析芦笋两性花与雄花的碳氮比及氮化合物相关基因可变剪接的不同.docVIP

探析芦笋两性花与雄花的碳氮比及氮化合物相关基因可变剪接的不同 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：探析芦笋两性花与雄花的碳氮比及氮化合物相关基因可变剪接的不同 1 1、材料和方法 2 2、结果与分析 4 3、讨论 7 文2：芦笋高效栽培技术 8 1 适生条件 9 2 栽培技术 9 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 13 正文 探析芦笋两性花与雄花的碳氮比及氮化合物相关基因可变剪接的不同 文1：探析芦笋两性花与雄花的碳氮比及氮化合物相关基因可变剪接的不同 芦笋属于天门冬科天门冬属多年生植物，由于其具有较高的营养价值和较好的药用保健功能而深受人们喜爱[1]。芦笋雌雄异株，其性染色体处于植物性染色体进化途径的中间位置，性别表现出多种类型，包括雌株(XX)、雄株(XY)、超雄株(YY)和雄性雌型株(简称两性株，基因型为XY)。它们之间主要的差异表现在花器官上。雌花具有健全的雌蕊，但雄蕊高度退化;而雄花具有发育良好的雄蕊，但雌蕊发育不完全，有的形成花柱，无柱头，有的既无花柱也无柱头。两性花含有完整的雄蕊，雌蕊发育完全，含有子房、花柱和柱头，并能正常结实[2，3，4]。因此，两性花是研究植物花器官发育、性别决定与分化的特殊遗传材料[5]。此外，由于两性花自花或异花授粉(XY×XY→1YY+2XY+1XX)，产生超雄株(YY)。以它作为父本产生的后代全部为雄株(XX×YY→XY)。已有研究表明，芦笋雄株产量较同期雌株高[6]，因此培育全雄品种是芦笋育种的重要方向，而两性株是培育芦笋全雄品种的重要资源材料。但自然界中存在的两性株极少，这极大地限制了芦笋种质资源创新和全雄品种选育。因此，研究芦笋性别调控机理，将为促进两性花形成和丰富芦笋资源材料奠定基础。 已有研究表明，碳氮比与植物花芽性别分化相关[7，8]。碳氮化合物是植物花芽分化过程中重要的营养物质。20世纪初提出的碳氮比学说认为碳氮比对控制花芽分化起着重要作用[9]。在希尔核桃中，发现N的缺乏会加剧雌花败育，并且雌花败育时，2年生核桃枝条木质部中的氮和淀粉含量降低到最低点[10]。张建铭等[11]研究大花栀子花芽分化过程中碳氮比的变化，发现在花芽孕育期碳氮比急剧升高，推测碳氮比对于花芽孕育起着主要的作用。为探明芦笋两性花、雄花发育与碳氮化合物的关系，本研究比较分析了芦笋两性花与雄花不同发育阶段碳氮化合物含量及相关基因表达水平的动态变化，将有助于揭示芦笋两性花与雄花发育的调控机理。 1、材料和方法 试验材料 以芦笋品种冠军为试验材料，并将其种植于四川省农业科学院经济作物育种栽培研究所试验基地。在2016-2018年春季芦笋现蕾期-开花期进行形态学观察。在芦笋盛花期分别挑取20株正常生长且生长较一致的两性株和雄株，按照花蕾从小到大分为(±)mm，(±)mm，(±)mm，(±)mm共4个级别，在LeicaS8APO体式显微镜下对其形态特征进行观察比较，每级观察30个花蕾。花蕾从植株上摘下后，立即观察，将花蕾一半的花瓣剥离，置于体式显微镜下观察拍照，对比同一时期的两性花、雄花花蕾的形态差异，具两性花特点并且后期结出果实的雄性雌型株标记为两性株。 碳氮化合物的测定 分别取两性株、雄株发育至性别分化与性别决定的前期(花蕾长度(±)mm)、中期(花蕾长度(±)mm)、后期(花蕾长度(±)mm)3个时期的花蕾2g。样品烘干后研磨粉碎至，采用岛津NC-80型全自动碳氮分析仪测定两性花蕾与雄花蕾的碳、氮化合物总含量。 提取、文库构建和测序 分别提取两性花、雄花3个时期的花蕾总RNA。采用TRIzol(购于Invitrogen公司)进行总RNA的提取。依据两性花、雄花发育时期的先后顺序，将各时期RNA池分别标记为H1、H2、H3、M1、M2、M3。RNA-Seq测序由深圳华大基因研究院完成，采用HiSeqX10测序。 数据分析方法 从芦笋基因组数据库下载芦笋全基因组序列及其注释文件。采用软件HISAT2将RNA-seq测序得到的高质量数据序列与芦笋基因组进行序列比对，使用rMATs软件对样品中可变剪接事件进行分类和统计。主要的可变剪接事件有5种:外显子跳跃、内含子滞留、5′端可变剪切位点、3′端可变剪切位点、互斥外显子。 对于雄花与两性花各发育时期中发生可变剪接的基因，本研究采用rMATS软件分析了各样本中共有及特有的可变剪接基因数量。应用TermFinder软件，获得包括生物学过程(Biologicalprocess)、分子功能(Molecularfunction)和细胞构成(Cellularcomponent)等类别的GO注释编号。利用在线工具进行功能富集分析，统计每