试析小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中孤儿核受体Reverbalpha的意义.docVIP

试析小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中孤儿核受体Reverbalpha的意义 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：试析小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中孤儿核受体Reverbalpha的意义 1 1、材料和方法 3 2、结果 7 3、讨论 9 文2：不同培养条件下间充质干细胞成骨分化中巨噬细胞的影响 12 1 MSC成骨分化 12 2 共培养条件下巨噬细胞对MSC成骨分化的影响 13 4 小结与展望 17 参考文摘引言： 18 原创性声明（模板） 19 文章致谢（模板） 20 正文 试析小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中孤儿核受体Reverbalpha的意义 文1：试析小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中孤儿核受体Reverbalpha的意义 文章快速阅读： 文题释义： 近日节律基因：是对维持生物体昼夜节律起关键性作用的节律基因，受生物钟控制，且表达量随昼夜循环而发生节律性变化，通过振荡器系统形成反馈调节环路而调控生物节律。近日节律基因控制着一系列生理活动，包括觉醒周期、内分泌、心血管活动、体温、胃肠道蠕动以及能量代谢等。 Rev-erbα：由甲状腺受体α(TRα)的反义链编码，是重要的近日节律基因，将昼夜节律与新陈代谢通路的转录调控联系起来。Rev-erbα是一种强大的转录抑制因子，在哺乳动物的核心分子节律中发挥重要作用，同时也是肝脏和棕色脂肪组织等代谢组织中钟基因输出的关键调节因子。 骨髓间充质干细胞具有自我更新和多向分化潜能，可以分化为成骨细胞、脂肪细胞、内皮细胞和软骨细胞[1，2]。骨髓间充质干细胞在正常骨代谢中发挥着关键作用，其成骨能力下降所导致的骨质疏松症已成为影响世界范围内人口生活质量的全球性健康问题。哺乳动物的骨形成是一个复杂而精细的过程，需要协调成骨细胞和破骨细胞的活性以维持骨稳态[3，4]。成骨细胞功能障碍是骨质疏松症发病机制的重要因素，但其机制尚不清楚[5，6]。骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞是由多个转录因子严格控制的。尽管已经报道过许多因子，包括转录因子、细胞因子和miRNA通过调节成骨细胞和破骨细胞活性来促进骨形成，但是在分子水平上严格控制骨平衡的机制仍然是未知的[7] 核受体(N)是一类配体依赖和独立的转录因子，参与激素(雌激素、甲状腺)、维生素(D和A)、代谢物(膳食脂类、胆汁酸、外源性药物、药物)和其他细胞内信号的转录过程[8，9]。核受体与相应的配体相互作用，调控众多靶基因的表达，在机体的生长发育、新陈代谢、细胞分化及体内许多生理过程中发挥重要作用。维生素D受体和雌激素受体对于钙稳态和维持骨密度具有明确的重要性，糖皮质激素对骨骼有直接和间接的影响，是导致骨质疏松的重要因素[10，11，12，13，14]。还有一些以前被认为与骨代谢无关的核受体，例如雌激素相关受体以及过氧化物酶体增殖激活受体，已被证实对骨形成有作用[15，16，17]。研究发现，过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPAR-γ)是调节成骨的关键，Rev-erba是过氧化物酶体增殖激活受体γ的靶基因[17]。不仅如此，Rev-erba还能够直接调控核心生物节律基因Bmal1的表达[18]，Bmal1与骨髓间充质干细胞的增殖与成骨分化过程紧密相关。最近有研究证实在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中孤儿核受体Rev-erbα的表达呈下降趋势[19]，以上均提示Rev-erbα在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中可能发挥了一定的作用，由此作者推测Rev-erbα可能参与了骨髓间充质干细胞成骨分化过程。为进一步了解Rev-erbα在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的作用，设计了该实验。 1、材料和方法 设计 细胞对照观察实验。 时间及地点 2018年1月至2019年8月在西南医科大学口颌面修复重建与再生实验室完成。 材料 4周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠10只，体质量(20±5)g，由西南医科大学动物实验中心提供，合格证号：SYXK(川)2013-065。 α-MEM培养基、胎牛血清(Hyclone，美国)；胰蛋白酶、EDTA、β-磷酸甘油酸钠(Gibco，美国)；地塞米松(Gibco，美国)；维生素C(Sigma，美国)；Trizol(Invitrogen，美国)；Real-timeSYbr试剂盒、引物(Takara，日本)；WesternMarker(Fermentas，美国)；SDS变性蛋白上样缓冲液、SDS凝胶配制试剂盒(碧云天，中国)；Rev-erbα单克隆抗体(Abcom，美国)；GAPDH抗体(Bioworld，中国)；病毒转染所用试剂：T4连接酶、小量抽提试剂盒、大量抽提试剂盒、凝胶回收试剂盒、限制性内切酶、200bpladder(上海汉恒生物