单纯疱疹病毒2型DNA疫苗免疫效果受板蓝根的影响分析.doc

单纯疱疹病毒2型DNA疫苗免疫效果受板蓝根的影响分析 目录 TOC \o "1-9" \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：单纯疱疹病毒2型DNA疫苗免疫效果受板蓝根的影响分析 1 1、材料与方法 2 2、结果 5 3、讨论 7 文2：单纯疱疹病毒脑炎12例分析 8 1 资料 8 2 结果 9 3 讨论 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 单纯疱疹病毒2型DNA疫苗免疫效果受板蓝根的影响分析 文1：单纯疱疹病毒2型DNA疫苗免疫效果受板蓝根的影响分析 板蓝根是我国重要的传统中药之一，为十字花科植物，具有清热解毒和凉血利咽的功效，用于治疗流感、流行性肝炎和流行性乙型脑炎已有数百年的历史[1]。研究表明，板蓝根提取物中鉴定出了生物碱类、有机酸类、木脂素类、芥子苷类、核苷类、黄酮类、氨基酸类、甾醇类、含硫类化合物和微量元素等成分[2]，其中板蓝根多糖（isatisrootpolysaccharide，IRPS）是最重要的活性成分之一，主要由木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖和半乳糖组成[3]，具有抗菌及抗病毒等功效[4] 单纯疱疹病毒-2型（HSV-2）主要通过皮肤和黏膜感染，是引起生殖器疱疹（GH）主要病因之一。研究表明，超过85%的生殖器疱疹患者由HSV-2引起[5]，接种疫苗是预防其感染的有效途径。DNA疫苗纯度高，特异性强，能诱导机体产生持久的体液免疫和细胞免疫，具有重组亚单位疫苗的安全性、减毒活疫苗诱导全面免疫应答的高效性和同种异株的交叉保护作用。但DNA疫苗的免疫原性较弱，导致其保护和治疗作用受限[6]。因此，寻找合适的免疫佐剂以提高HSV-2DNA疫苗对机体的保护力显得尤为重要。近年研究发现，中药多糖可增强机体的免疫功能，如通过刺激单核-巨噬细胞系统的吞噬功能，促进T、B淋巴细胞增殖和转化、抗体生成及细胞因子的分泌等[7]。本实验使用水煎醇沉法提取IRPS，与HSV-2DNA疫苗共免疫小鼠，观察IRPS对该疫苗免疫效果的影响，探讨其作为疫苗佐剂的可能性。 1、材料与方法 原料 板蓝根粉末购自祁新中药颗粒饮片有限公司。 疫苗 HSV-2DNA疫苗pgD（含HSV-2糖蛋白gD全长序列基因）[8]由浙江省医学科学院生物工程研究所提供。 载体及病毒 真核表达载体pcDNA3kan(pKan）由浙江省医学科学院生物工程研究所提供；灭活HSV-2(Sav株）由该所培养及保存。 主要试剂 DNAmarkerDM1000及无内毒素质粒中量抽提试剂盒购自杭州新景生物试剂开发有限公司；快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司；CellTiter96A誖Queous单溶液细胞增殖检测试剂盒购自美国Promega公司；刀豆蛋白A(ConA）购自美国Sigma公司；葡萄糖标准品由广东省化学试剂工程技术研究开发中心提供；RPMI1640完全培养液购自美国Gibco公司；HRP标记的羊抗鼠IgG、IgG1和IgG2a试剂盒均购自美国Abcam公司；IFNγ和IL-10试剂盒购自美国ThermoFishecientific公司；其他试剂均为国产或进口分析纯。 实验动物 SPF级雌性BALB/c小鼠，40只，鼠龄6～8周，体重18～22g，购自浙江省实验动物中心，动物合格证号：SCXK（沪）2018-0006。 的提取 采用水煎醇沉法。称取200g板蓝根粉末，按料液1∶15的比例加入3L蒸馏水，于55℃水浴，纱布过滤，3000×g离心10min，收集上清，经旋转蒸发仪浓缩至400mL（真空度：8mbar，旋转速率：1×105min，水浴温度：℃），加入4倍体积95%乙醇，静置醇沉72h;3000×g离心10min，收集上清，透析48h；再次旋转蒸发，冷冻干燥，即获得IRPS。 含量的测定 称取10mg葡萄糖标准品，用蒸馏水溶解，定容至100mL，取0、、、、、至试管中，分别补加蒸馏水至，每组设3个平行。加入5%苯酚溶液，摇匀，沿管壁缓慢加入浓硫酸，室温静置30min，用酶标仪检测A450值。以葡萄糖标准品质量为横坐标，A450值为纵坐标，绘制标准曲线。精确称量IRPS10mg，用蒸馏水溶解，定容至50mL。取至试管中，补加蒸馏水至，后续检测同上。将所得A450值代入标准曲线方程，得出多糖含量，计算产率。 动物分组及给药 将40只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、pgD疫苗组（100μg）、pgD+IRPS组（100μg+150μg）、pKan+IRPS组（100μg+150μg）、IRPS组（150μg），每组8只，均经小鼠后腿肌肉注射，100μL/只，初次免疫后2周，加强免疫1次，免疫剂量及