采用QuEUPLCMSMS法测定动物源性食品中氯霉素类药物的残留量.doc

采用QuEUPLCMSMS法测定动物源性食品中氯霉素类药物的残留量 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：采用QuEUPLCMSMS法测定动物源性食品中氯霉素类药物的残留量 1 1、材料和方法 2 2、结果与讨论 4 3、结论 5 文2：免疫层析法测定动物源性食品中磺胺嘧啶残留 5 1 材料与方法 6 (7)样品预处理 8 2 结果 10 3 讨论 13 参考文摘引言： 14 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 16 正文 采用QuEUPLCMSMS法测定动物源性食品中氯霉素类药物的残留量 文1：采用QuEUPLCMSMS法测定动物源性食品中氯霉素类药物的残留量 氯霉素又名氯胺苯醇，是一种广谱抗菌素，可有效抑制革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌等多种病原菌[1]。由于氯霉素具有面世时间早、药性稳定、价格便宜等优点，曾被广泛应用于畜禽疾病的控制与治疗[2]。但是，食品中残留的氯霉素会对人体健康造成威胁，如可逆性骨髓抑制、神经系统受损等，故西方发达国家已将氯霉素列为违禁药物[3]。我国现行有效标准《动物源性食品中兽药最高残留限量》(农业部第235号公告)中也明确规定，氯霉素在动物源性食品中不得检出[4]。甲砜霉素是氯霉素的同类物[5]，其抗菌谱和抗菌作用与氯霉素相仿——具有广谱抗微生物作用，可有效杀灭流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌[6]。作为氯霉素的替代品，甲砜霉素能有效克服氯霉素导致的再生障碍性贫血的副作用[7]，故被广泛应用于动物源性食品的生产以防治畜禽由流感杆菌、大肠杆菌、沙门菌属感染导致的呼吸系统、肝胆系统、泌尿系统和消化系统疾病[8]，但甲砜霉素残留量过高也会对人体健康造成危害。因此，全球各国分别制定了甲砜霉素在肉类食品中的最高残留限量[9]。我国农业部第235号公告中规定，食品中甲砜霉素的最大残留限量为50μg/kg。 表1实验梯度洗脱程序设置参数 由于动物源性食品中氯霉素类药物残留量超标会影响肉、蛋、奶等食品的安全性，不仅会对人体健康产生危害，还不利于我国养殖业的健康发展，更会对我国农产品的出口造成不利影响[10]。因此，开发一种简便、高效、安全的氯霉素类兽药残留检测方法已迫在眉睫。本研究利用QuE-UPLC/MS/MS法测定草鱼、猪肉、牛奶、蜂蜜等动物源性食品中氯霉素类药物的残留量，希望能对相关检测工作起到借鉴作用。 1、材料和方法 所需仪器设备和试剂样品 WateXevoTQD三重四极杆液质联用仪，沃特世公司;ME204T分析天平，梅特勒-托利多集团;EPED-PLUS-E3超纯水机，南京易普易达科技发展有限公司;HD-2500多管漩涡混合仪，杭州佑宁仪器有限公司;MV5多通道平行浓缩仪，北京莱伯泰科仪器股份有限公司。 市售草鱼、猪肉、牛奶、蜂蜜等动物源性食品;色谱纯乙腈，氯霉素、甲砜霉素标准品，坛墨质检;ProElutQuE2mLTube固相萃取净化管、μmProMax尼龙针头式滤器，迪马科技。 操作方法 .1猪肉、草鱼、蜂蜜样品 依次在15mL离心管中加入待测样品、，搅拌均匀后加入乙腈，在多管漩涡混合仪中涡旋混匀1min。振荡5min，8000rpm下离心3min，取1mL上清液待净化。 .2牛奶样品 在15mL离心管中加入待测样品、，搅拌均匀后加入乙腈，在多管漩涡混合仪中涡旋混匀1min。振荡5min，8000rpm下离心3min，取1mL上清液待净化。 将1mL提取液转移到ProElutQuE2mLTube固相萃取净化管，涡旋混合30s。10000rpm下离心1min，取上清液500μL于浓缩管中，加水100μL，涡旋混匀，室温下氮吹至剩余约100μL溶液，加水定容至500μL，混匀，过μm微孔滤膜，进LC-MS/MS分析。 .1UPLC条件 色谱柱C18:100×，μm;流速:/min;进样量:5μL;柱温:35℃;流动相A:10mmol/L乙酸铵，流动相B:乙腈;实验梯度洗脱程序设置参数如表1。 .2质谱条件 电离模式:ESI;扫描方式:负离子扫描;检测方式:多反应监测;电喷雾电压:-4500V;雾化器压力:50psi;辅助气气压:50psi;气帘气压力:20psi;离子源温度:500℃。 2、结果与讨论 提取溶剂的选择 查阅文献可知，氯霉素类药物残留的提取剂有乙腈、乙酸乙酯[11]、水[12]等，本实验比较了3种不同的提取溶剂对提取效果的影响。实验数据表明，以乙腈作为提取溶剂时，提取效果优于乙酸乙酯和水，故本实验选用乙腈作为提取溶剂。 色谱条件的优化 本研究分别以10mmol/L乙酸铵-乙腈、水-甲醇[13]、水-乙腈[14]为流动相，按照“.1”中的梯度洗脱条件进行检测。