应用研究和评价干血斑样本用于梅毒酶联免疫吸附试验检测技术.docVIP

应用研究和评价干血斑样本用于梅毒酶联免疫吸附试验检测技术 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：应用研究和评价干血斑样本用于梅毒酶联免疫吸附试验检测技术 1 1、材料与方法 2 2、结果 4 3、讨论 6 文2：公路工程试验检测技术 7 1公路工程试验检测技术概述 7 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 应用研究和评价干血斑样本用于梅毒酶联免疫吸附试验检测技术 文1：应用研究和评价干血斑样本用于梅毒酶联免疫吸附试验检测技术 近年来，全球梅毒流行形势严峻，我国流行病学调查显示，我国梅毒发病率亦呈上升趋势，而且梅毒防控仍缺乏有效的预防性疫苗；为了减少和防止梅毒的进一步传播，需加强和扩大检测，最大限度地发现梅毒感染者[1，2，3]。但在一些偏远或缺乏基础设施的地区及对于一些静脉采血实施困难的特殊人群中（如婴儿、儿童、老人及吸毒人群等）梅毒筛查较为困难[4，5，6]。因此，相对于传统的通过静脉穿刺后从相对大量的全血中提取的血浆和血清样本，干血斑样本（DBS）所需血容量小，便于采集（可通过指尖血、足跟血等），重量轻体积小便于存储，无需冷链运输等诸多优势使得它成为了一个潜在的可供选择的替代样本[7，8，9]。本文拟通过验证干血斑样本用于梅毒酶联免疫检测方法的实验室性能指标，并在此基础上进行了系统的初步应用研究，为干血斑样本及干血斑样本用于梅毒筛查工作的推广和应用提供更多的实验数据。 1、材料与方法 样本来源 北京市佑安医院与德宏傣族景颇族自治州疾病预防控制中心提供的血液样本。 方法 1）试剂：whatmanTM903滤纸(英国进口)，购自创智力合（北京）科技有限公司。梅毒螺旋抗体诊断试剂盒（ELISA法），购自北京万泰生物药业股份有限公司（双抗原夹心法，批号：N）。抗梅毒螺旋体，心磷脂抗体IgM检测试剂盒（欧蒙印迹法-免疫印迹法），购自欧蒙医学诊断（中国）有限公司（批号：D180607AA） 2）样本制备：使用含EDTA抗凝剂的真空采血管采集研究对象静脉血5 mL，用于制备干血斑及血浆样本。每个干血斑样本吸取70～100μL全血，垂直将全血滴加于滤纸片印圈中心处（含5个印圈），使之自然扩散，室温下自然干燥至少4 h，即可获得干血斑样本。将剩余全血样品以3 000 min离心15 min，分离血浆。血浆与干血斑样本均保存于-20℃待检。 血浆与干血斑样本均平行检测。干血斑样本检测时按照干血斑样本印迹剪切获得整个干血斑，放入 mL离心管，浸泡于500μL含1‰Tween20的PBS缓冲液中，室温洗脱至少4 h；洗脱后的液体用于梅毒抗体检测。实验操作与血浆样本一样，严格按照试剂盒说明书进行。血浆阳性样本需采用WB进行确证。 3）实验室性能评价：(1)线性分析：将10份梅毒抗体阳性全血和10份健康人全血分别进行混合后，用混合健康全血对混合梅毒抗体阳性全血进行系列稀释。按照干血斑样本制备、洗脱及干血斑样本用于梅毒ELISA检测方法，制备干血斑样本并进行梅毒抗体检测。以系列稀释次数为横坐标，检测结果S/CO比值为纵坐标，绘制血浆与干血斑样本检测结果曲线图，分析其线性范围。(2)敏感性与特异性：根据样本血清学背景信息分别筛选阴性样本及梅毒抗体阳性样本各15份，构建基于干血斑样本的实验室基础盘，评价干血斑样本用于梅毒ELISA检测方法的敏感性与特异性。共筛选18份干血斑样本，包括3份艾滋病病毒（HIV）抗体阳性样本、3份丙型肝炎病毒（HCV）抗体阳性样本、3份HCV/乙型肝炎病毒（HBV）合并感染样本、3份HIV/梅毒（TP）合并感染样本、3份HCV/TP合并感染样本及3份HIV/HCV合并感染样本，构建基于干血斑样本的实验室干扰盘，评价干血斑样本用于梅毒ELISA检测方法的分析特异性。(3)精密度分析：依据干血斑样本检测结果的线性范围筛选3个不同抗体水平（高、中、低）样本，构建基于干血斑样本的实验室精密度盘，用于干血斑样本梅毒酶联免疫检测方法的精密度分析。连续测定5天，每天分2批测定各个样本，每批每个样本双孔测定，计算天间精密度、批内精密度、斑间精密度。(4)样本稳定性：将上述不同抗体水平干血斑样本置于37℃环境下，连续7天每天定时取样检测，评价干血斑样本稳定性。 4）初步应用评价：分别按照血浆与干血斑样本的制备与检测方法进行检测，将血浆结果作为参考，分析干血斑样本用于梅毒ELISA检测的临床敏感性、临床特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）；采用Kappa检验分析二者之间的一致性并进行Spearman相关性分析。将血浆与干血斑样本的梅毒抗体检测结果S/CO比值分布进行比较分析，了解二者S/CO比值分布