第三章流式细胞仪.pptVIP

概述 流式细胞仪的应用 流式细胞仪历史 二 流式细胞仪的分类和基本结构一、流式细胞仪的分类二、流式细胞仪的基本结构（一）流动室与液流驱动系统（二）激光光源与光束成形系统 （三）光学系统（四）信号检测与分析（五）细胞分选器 一、流式细胞仪的分类 流式细胞仪根据功能不同可分为临床型和科研型。 临床型只有分析功能，没有分选功能，操作简便，易学易掌握。 科研型既有分析功能又有分选功能，可快速将所感兴趣的细胞分选出来。 一、流式细胞仪的分类 流式细胞仪根据其结构不同又可分为一般流式细胞仪和狭缝扫描流式细胞仪。 前者的光斑直径大于被检细胞体积，只能提供细胞内某种生物化学成分的参数。 狭缝扫描流式细胞仪 数据处理 细胞分选原理 水滴的形成 分选逻辑电路 水滴充电及偏转 光信号分离，导向，各探测通道PMT接收并转化为电信号。 光信号收集 （四）信号检测与分析 1.散射光信号 散射光分为前向角散射和侧向角散射， 散射光不依赖任何细胞样品的制备技术(如染色)，称 为细胞的物理参数（或称固有参数）。 可提供细胞内精细结构和颗粒性质的信息。 （四）信号检测与分析 2.荧光信号 当激光光束与细胞正交时，一般会产 生两种荧光信号。一种是细胞自身在激光照射下发出 微弱的荧光信号，称为细胞自发荧光；另一种是经过 特异荧光素标记细胞后，受激发照射得到的荧光信号 ，通过对这类荧光信号的检测和定量分析能了解所研 究细胞的性质和数量。例如细胞DNA含量、RNA 含量、总蛋白质含量等 FSC SSC FL1 FL2 FL3 对数 线性 线性 线性 对数 脉冲处理，模数转换 光信号 电信号 记录数据，显示结果 （面积，峰高，宽度） 复习： 1、FCM中是如何保证被测细胞是单个按顺序通过检测区？ 2、FCM中的光源一般是采用什么光源？为什么？ 请根据下FCM的工作示意图，大概说明其工作过程。 * 第三章 流式细胞技术与流式细胞仪 对比 流式细胞仪是一种特殊的显微镜 流式细胞仪 显微镜 流动的细胞 静止的细胞样本 数量大 数量少 高速分选 样本难以再利用 细胞群体特征量分布 可以揭示细胞内部结构信息 大家是否接触过流式细胞仪？它的主要作用是什么？ FCM(Flow Cytometry)成为检验室中的CT，应该极广泛。 70年代美国为攻克癌症而建造。 厂商： Becton-Dickson Coulter-Beckman DOCytomation 已成为一个几十亿美金的产业 应用领域 疾病诊断 生物学基础研究 环境监测 海洋微生物研究 农业领域应用 等等 特点： 光路调节系统固定 自动化程度高 操作简便 使用寿命长 配备1-2根激光 细胞分选速度慢， 主要用于细胞分析 临床型（台式机FCM） 临床型FCM 科研型FCM 特点： 分辨率高 选配多种波长和类型激光器 可把感兴趣细胞分选到特定培养孔或板上（4路和24孔板） 适用于高速分选和多色分析 流式细胞术的定义:应用流式细胞仪对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行快速的、多参数的定量分析和分选的技术称为流式细胞术。 流式细胞仪的定义:流式细胞仪是以激光为光源，集流体力学技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。 。 生物学颗粒包括大的免疫复合物、DNA、RNA、蛋白质、病毒颗粒、脂质体、细胞器、细菌、霉菌、染色体、真核细胞、杂交细胞、聚集细胞等，所检测的生物颗粒的理化性质包括细胞大小、细胞形态、胞浆颗粒化程度、DNA含量、总蛋白质含量、细胞膜完整性和酶活性等。 免疫学、血液病变学等方面。 1934年Moldavan 使悬浮的血红细胞从一个毛细玻璃管中流过，每个通过的细胞可被一个光电装置记录下来，这可谓流式细胞仪的最初模型。 1965年Kamentsky用紫外吸收和可见光散射两个参数同时测量未染色的细胞，给出了细胞中核酸的含量和细胞大小，奠定了多参数流式细胞测量的基础。 1967年Van Dilla 和Los Alamos采用了Crosland-Taylor设计的层流流动室和氩离子激光器开发出了液流束、照明光轴，检测系统三者互相垂直的流式细胞仪，成为目前各种流式细胞测量仪的基础。 1969年Fulwyler利用