HPLC法测定阿司匹林中游离水杨酸含量.pptVIP

HPLC法测定阿司匹林中游离水杨酸含量 戴云坚 殷炜铭 邵加安 陈铁刚 第一页，共二十六页。 背景 阿司匹林是一非甾体类解热镇痛、抗炎、抗风湿药物。在其生产过程中乙酰化不完全或储藏过程中水解产生的水杨酸对人体有毒性.因此有必要对阿司匹林中的水杨酸进行限量和含量的测定。《中国药典》一直沿用对照品化学反应目视比色法判断结果，此方法当对照品溶液与供试品溶液颜色相近时易造成判定误差。此次实验设计HPLC法检查阿司匹林中的水杨酸。 第二页，共二十六页。 实验仪器及试药 仪器 agilent高效液相色谱仪,岛津LC-10A(单泵)高效液相色谱仪；量筒,移液管，容量瓶。 试药 阿司匹林样品、 水杨酸对照品、冰醋酸、无水甲醇、超纯水。 第三页，共二十六页。 实验方法 色谱条件 色谱柱：C18色谱柱（4.6X150mm）；流动相：1%冰醋酸-甲醇(50：50)(组1),甲醇：水：冰醋酸(8：4：1)(组2) ；检测波长：300nm；流速：0.8ml·min-1；柱温：室温 第四页，共二十六页。 溶液的配制 水杨酸对照品溶液：水杨酸对照品0．1g 100mL量瓶 取此液1.0ml 100mL量瓶 10μg/mol 阿司匹林样品溶液： 阿司匹林对照品0.1g 100mL量瓶 1mg/moL 组2: 冰醋酸：甲醇（1：10） 组1: 1%冰醋酸-甲醇(50：50) 第五页，共二十六页。 系统适应性 水杨酸及阿司匹林的高效液相分离图谱及保留时间的确定: 分别取水杨酸对照品溶液、阿司匹林供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。 第六页，共二十六页。 组1 第七页，共二十六页。 组2 第八页，共二十六页。 水杨酸精密度试验 　按溶液配置中的方法配置水杨酸对照品溶液，从溶液配置到进样，重复6次，计算水杨酸峰积分面积的相对标准差（RSD≤5%）。 最低检出限试验(组1) 精密吸取水杨酸对照品溶液，用流动相逐级进行稀释。当记录的色谱图中信噪比为10：1时。确定水杨酸的定量限，信噪比为3：1时确定检测限。噪音信号为2.1ng/ml，检测限为6.3ng/ml。 第九页，共二十六页。 进样 峰面积 峰面积/浓度 平均（峰面积/浓度） RSD（%） 1 801746.8 80174.68 80515.8 0.38 2 802056.1 80205.61 3 807673.3 80767.33 4 804326.7 80432.67 5 805846.9 80584.69 6 809299.3 80929.93 进样 浓度（μg/ml） 峰面积 峰面积/浓度 平均（峰面积/浓度） RSD（%） 1 9.84 352.25934 35.80 35.365 0.82 2 9.89 352.25226 35.62 3 10.05 352.83932 35.12 4 10.05 352.69876 35.09 5 10.07 352.64520 35.20 6 9.97 352.55164 35.36 组１：水杨酸精密度试验结果表 组２：水杨酸精密度试验结果表 第十页，共二十六页。 水杨酸的线性试验 配制不同浓度的水杨酸溶液作为标准溶液。各取20μl依次注入液相色谱仪，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归处理，得水杨酸回归方程。 组１：4、6、10 、 16 、 20μg/ml 组２：1.5 、 3 、 6 、 9 、 15 、 24 、 30μg/ml 第十一页，共二十六页。 组1 第十二页，共二十六页。 组2 第十三页，共二十六页。 回收率试验 100ml量瓶 加入阿司匹林50mg（组１）／100mg(组２） ① ② ③ 0.5mL浓度为1mg/mL的水杨酸溶液/ 5.0ml浓度为10ug/mL的水杨酸溶液 稀释 进样20μl 计算平均回收率 1.0mL浓度为1mg/mL的水杨酸溶液/ 15.0ml浓度为10ug/mL的水杨酸溶液 1.5mL浓度为1mg/mL的水杨酸溶液/ 25.0ml浓度为10ug/mL的水杨酸溶液 第十四页，共二十六页。 组１：回收率试验结果 组别 加入阿司匹林量（mg） 加入水杨酸量(mg) 水杨酸理论总加入量(mg) 实际所测水杨酸量(g) 回收率(%) 1 49.5 0.4965 0.71331 0.65700 92.1 2 51.0 0.993 1.21638 1.31051 107.8 3 49.6 1.4895 1.70675 1.88565 11