第四章 细胞培养与代谢调控.pptVIP

第三十页，共四十四页。 酶活性调节---共价修饰调节 酶蛋白肽链上某些残基在酶的催化下发生可逆的共价修饰，从而引起酶活性改变，这种调节称为酶的共价修饰。 共价修饰的主要方式： 1、磷酸化 - - - 去磷酸 2、乙酰化 - - - 脱乙酰 3、甲基化 - - - 去甲基 4、腺苷化 - - - 脱腺苷 5、单价巯基- - -二硫键 -OH Thr Ser Tyr 酶蛋白 H2O Pi 磷蛋白磷酸酶 ATP ADP 蛋白激酶 Thr Ser Tyr -O-PO32- 磷酸化的酶蛋白 共价修饰的特点： 1、酶蛋白的共价修饰是可逆的酶促反应，在不同酶的作用下，酶蛋白的活性状态可互相转变。 2、具有放大效应，效率较变构调节高。 3、磷酸化与脱磷酸是最常见的方式。 4、同一个酶可以同时受变构调节和化学修饰调节。 第三十一页，共四十四页。 细胞贴壁过程 第一页，共四十四页。 贴附 接触抑制 密度抑制 细胞呈贴壁生长,梭形或不规则形, 在粘附因子的作用下，细胞生出伪足，伪足越多，贴壁越好。 细胞在生长过程中达到相互接触时停止分裂的现象。因此，贴壁细胞通常都是单层细胞培养状态。 细胞接触后，虽发生接触抑制，但只要营养充分，细胞仍会增殖分裂，细胞数量仍在增多。但当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少， 代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停止。 第二页，共四十四页。 粘附型细胞分为： 1、成纤维细胞型：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，中有卵圆形核。生长时排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起。 2、上皮型细胞：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核。生长时易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动。 3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。 4、多形型细胞：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。 第三页，共四十四页。 细胞培养的条件 1、无菌、无毒： （1）对培养液和所有用具进行无菌处理 （2）添加一定量的抗生素，防治培养过程中的污染 （3）定期更换培养液，以便清除代谢产物防治细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害 2、全部的营养物质： 葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素、动物血清等。 3、适宜的温度和PH值： 36.5+0.5度, PH值 4、必要的气体条件： O2 ：细胞代谢所必需的 CO2：维持培养液的PH 通常采用培养皿或松盖培养瓶将其置于含95%空气和5%CO2的培养箱中进行培养 5、其他： 光照、湿度等 第四页，共四十四页。 细胞培养的方式 根据细胞生长方式分为贴壁培养和悬浮培养两大类； 根据细胞代次分为原代培养和传代培养； 根据细胞培养操作方式分为： 1、固定化培养：通过一些固相的交联化合物将细胞固定于小格中，或者通过共价键交联住细胞，在培养基中进行培养。 2、分批培养：将细胞和培养基一次性加入反应器内进行培养，此后细胞不断增长，产物不断形成和积累，最后将培养基连同细胞一并取出，培养结束。 3、流加培养：在分批培养的基础上间断地或连续地补加培养基。 4、半连续培养：当细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，取出部分培养物或细胞，然后补充同样数量的新鲜培养基，继续培养。 5、连续培养：连续性加入新鲜的培养基，同时取出相同量的旧培养基和细胞。 6、灌流培养：当细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产物形成过程中，不断地将部分条件培养基取出，同时不断地补充新鲜培养基。通常用于被固定后的细胞培养。 第五页，共四十四页。 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 特殊的概念： 永生化细胞：正常细胞的生长代谢处于增殖、分化、衰老及凋亡的动态平衡，体外增殖是有限的，培养细胞生命的自然极限称为海弗利克极限。细胞内控制这一系列过程的是一个庞大复杂的细胞调节网络，其中任何一个环节发生错误，都有可能触发细胞内相互关联的一系列信号分子的表达和功能异常，使细胞跨越海弗利克极限，获得不死性，发生永生化。 细胞系：指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。 无限细胞系：细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系，也称连续细胞系。 有限细胞系：初代培养物开始第一次传代