中药制剂分析-第七章-生物样品内中药制剂化学成分的分析.pptxVIP

;;大纲要求 1. 掌握生物样品内中药制剂化学成分分析的特点、分析方法的建立及评价。 2. 熟悉常用的生物样品及制备方法。 3.了解生物样品内中药制剂分析的最新进展。;;研究中药成分在生物样品内的数量和质量变化，获得药物代谢动力学的各种参数、药物在生物样品内的生物转化、代谢的方式和途径等信息，从而为药品生产、临床医疗、实验研究等方面对所研究药物作出估计与评价。;1. 分析方法学的研究 关键性问题 2. 生物样品内中药成分研究 原型药物、代谢产物 3. 生物样品内内源性物质的测定和研究 代谢组学;1. 干扰杂质多：内源性物质，如蛋白质、多肽、脂肪酸、酶等；代谢物、共存药物等 2. 样品量少：生物体采样量受限 3. 分析方法要求高：高选择性、灵敏度;;1、能够反映出浓度与药效之间的关系 2、易于获得 3、便于处理、适合分析 4、根据不同检测目的与要求进行选取;按照生物样品的性质，生物样品可分为： 均匀样品：血液、尿液、唾液、胆汁、脑脊液、淋巴液等 非均匀样品：心、肝、脾、肺、脑等组织;（一）血样 （二）尿液 （三）唾液 （四）组织;最常用的生物样品 1.采血方式及评价 人：多用静脉采血 动物：心脏、动脉、静脉 采血量：不超过动物总血量的15-20%;2.血样的处理 （1）血浆的制备 2500-3000r/min，5-15min （2）血清的制备;1. 用途：药物剂量回收、肾清除率及代谢类型等研究 体内中药清除主要是通过尿液排出，药物以原型、代谢物、缀合物形式排出 2. 收集方法：规定的时间内采集尿液;3.特点 3.1 尿中药物浓度改变不直接反映血药浓度 3.2 尿液药物浓度较高，但浓度变化较大，需要记录排出的尿液体积及尿药浓度 3.3 短时间内不能多次取样，不易采集完全等缺点;1.用途：可用作药物浓度检测及药代动力学研究 唾液中药物浓度通常与血浆浓度相关，比血浆药物浓度低 2. 收集方法：漱口后15min收集 3. 特点：不同唾液腺分泌不同的唾液，成分不尽相同；个体差异大;用于研究成分在各器官、组织的分布、积蓄或代谢研究 脏器组织可与成分形成强烈结合 分离分析前，需预先制成1：5或1：10匀浆，提高溶剂抽提率，降低组织空白值，避免乳化;（一）去除蛋白处理 1.加入与水相混溶的有机溶剂 2.加入中性盐 3.加入强酸 ;有机溶剂使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化 沉淀剂：乙腈（2倍）、甲醇（3倍） 乙醇、丙酮：很难挥干浓集 超速离心（15000r/min） 去除90％蛋白 加保护柱;蛋白质脱水沉淀 沉淀剂：硫酸铵、硫酸钠、镁盐、枸橼酸盐 1：2 90％去除 超速离心（15000r/min）;常用溶剂（与蛋白质阳离子形成不溶性盐沉淀）：10％三氯醋酸、6％高氯酸、硫酸－钨酸混合液体积比：1：0.6 90％去除 方法：超速离心（15000r/min）;净化： 1.液－液萃取法（liquid-liquid extraction, LLE) 关键：有机溶剂的特性、有机溶剂相和水相的体积、水相的pH值 注意：乳化 2.固相萃取法(solid-phase extraction, SPE) 3.固相微萃取法(solid-phase micro-extraction, SPME) 特点：商品化小柱、萃取效率高，可减少生物样品的用量;富集： 1.直接通入气流吹干：压缩空气、氮气 2.减压挥去溶剂：真空干燥器 3.真空离心浓缩仪;含义：中药待测成分或其代谢物与体内的内源性物质结合生成的产物 特点：缀合物极性较母体药物大，亲水性强，不易被有机溶剂提取，需水解处理;;1.色谱峰 HPLC-MS/MS;GC-MS/MS 2.光谱法 3.免疫分析法;1.文献总结 2.待测成分的理化性质 3.生物样品的类型 4.待测中药制剂化学成分的预期浓度范围 5.分析测定的目的及要求;（一）分析方法的建立 （二）质控样品及意义 （三）分析方法的验证 ;1.以纯品进行测定：Rt 2.空白样品测定: 内源性干扰 3.空白样品中添加对照品后测定 4.空白样品中添加内标物后测定 5.模拟生物样品测定 6.生物样品的测定;示例;1.质控样品（Quality controlsample,QC) ：指将一定量的待测成分，加入到空白生物基质中，配制的模拟生物样品。LQC、MQC、HQC 2.意义：用于全程的质量控制，包括分析方法的精密度、准确度、提取回收率及样品稳定性等测定与分析数据的质量控制。 3.数据要求：偏差一般应小于15%，RSD≤15%，最多允许1/3不在同一浓度质控样品结果超限。;1.专属性 2.标准曲线与线性范围 3.残留效应 4.准确度 5.精密度;1.1 目的