中药制剂分析-第六章-中药制剂中各类化学成分分析.pptx

;;第一节 生物碱类成分分析; 生物碱（alkaloids）指来源于生物界（主要是植物界）的一类含氮有机化合物，绝大多数生物碱由C、H、O、N元素组成;概述;概述;概述;概述;沉淀反应法;供试液制备;;;;;;;三、含量测定;;沉淀法是利用沉淀试剂与生物碱反应生成难溶性的沉淀，将生物碱以沉淀形式从初提取液中分离出来，然后过滤、洗涤、干燥、称重，计算生物碱含量的方法 相对于萃取法，沉淀法取样量少、灵敏度高，但操作繁琐、费时、计算复杂，且影响沉淀生成和沉淀纯度的因素较多（如沉淀试剂、???应溶液的浓度、pH值、温度及一些非生物碱成分与试剂生成沉淀干扰等）;;中药制剂中化学成分复杂，许多酸性成分与生物碱类成分共存，干扰测定，因此酸碱滴定前样品液常需经分离纯化处理;;在适当的pH介质中，生物碱B可与氢离子（H+）结合成盐，成为阳离子BH+，而酸性染料（HIn）在此条件下解离为阴离子In-，生物碱盐的阳离子与酸性染料阴离子定量地结合成有色的离子对 BH十十In－→（BH十·In－）水相→（BH十·In－）有机相 该离子对可定量地溶于某些有机溶剂，在一定检测波长下测定有机相提取液的吸光度，即可按分光光度法测定生物碱的含量;应用本法的关键在于介质的pH值、酸性染料的种类和有机溶剂的选择，其中pH值的选择更为重要。若pH值偏低，虽生物碱以阳离子BH+的形式存在，但染料仍以游离酸形式存在；若pH值偏高，染料以阴离子In-形式存在，而生物碱却以游离状态存在，上述两种情况均不能使阴、阳离子定量结合。依据染料的性质及生物碱的碱性（pKa）大小来确定介质的pH值 常用的酸性染料有甲基橙、溴甲酚绿、溴百里酚蓝、溴酚蓝和溴甲酚紫等 选择有机溶剂的原则是根据离子对与有机相能否形成氢键以及形成氢键能力的强弱而定，三氯甲烷、二氯甲烷可与离子对形成氢键，有中等程度的提取率，且选择性较好，是常用的提取溶剂 水分的混入可使有机相发生浑浊，且将水相中过量染料带入了有机相，影响测定结果。可在有机相提取液中加入适量脱水剂（如无水硫酸钠）或经干燥滤纸滤过除去微量的水分;;;雷氏盐也称雷氏铵或硫氰酸铬铵{NH4[Cr(NH3)2(SCN)4? H2O]}，为暗红色的结晶或结晶性粉末。微溶于冷水，易溶于热水，可溶于乙醇 雷氏盐在酸性介质中可与生物碱类成分定量生成难溶于水的有色配合物。生物碱阳离子BH+与雷氏盐的阴离子[Cr(NH3)2(SCN)4]-结合，生成生物碱雷氏盐沉淀BH[Cr(NH3)2(SCN)4]，为单盐形式的沉淀；若生物碱中含2个碱性氮原子，当溶液酸性较大时，其二级解离度增大，易形成BH2+，可与2个[Cr(NH3)2(SCN)4]-结合形成沉淀BH[Cr(NH3)2(SCN)4]2，称双盐 结构中只含1个碱性氮原子的生物碱，与雷氏盐反应的沉淀组成受pH值的影响较小；含2个以上氮原子的生物碱，视其各氮原子碱性强弱，与雷氏盐反应的沉淀组成和pH值有关：碱性较强的生物碱在酸性较小的溶液中生成单盐，在酸性较大的溶液中可相应地生成双盐、叁盐等；碱性较弱的生物碱，则无论溶液酸性高还是低均生成单盐；季铵类生物碱分子中有几个季铵氮原子，即与几个沉淀剂分子结合;生物碱雷氏盐沉淀易溶于丙酮，可将沉淀滤过洗净后溶于丙酮直接比色测定，应注意丙酮溶液所呈现的吸收特征是由于分子结构中雷氏盐部分，而不是生物碱部分，所以需换算成生物碱的含量 也可以精密加入过量雷氏盐试剂，滤除生成的生物碱雷氏盐沉淀，滤液在520nm～526nm进行比色测定残存的过量雷氏盐含量，间接计算生物碱的含量。硫氰酸铬铵在丙酮中的摩尔吸收系数e= 106.5（单盐），故可根据其吸收度A按下式直接测定 m-被测物的质量，mg；M-被测物质的相对分子质量；V-溶解沉淀所用丙酮的体积，ml 进行雷氏盐比色法测定时，需注意：雷氏盐的水溶液在室温可分解，故用时应新鲜配制，沉淀也需在低温进行；供试品如为稀的水溶液（如注射液等），沉淀前应浓缩；中药制剂中含有干扰物质时，应事先净化处理；雷氏盐丙酮溶液的吸光度，随时间而有变化，应尽快测定;;;利用在弱酸性或中性溶液中生物碱可与苦味酸定量生成苦味酸盐沉淀，该沉淀可溶于三氯甲烷等有机溶剂，也可在碱性下解离释放出生物碱和苦味酸进行含量测定 具体测定方法有三种：一是滤取生物碱苦味酸盐沉淀，洗去多余试剂，加碱使沉淀解离，以有机溶剂萃取游离出的生物碱，用含有苦味酸的碱性水溶液进行比色测定，再换算出生物碱的含量；二是在pH7的缓冲溶液中加苦味酸试剂，使生物碱与苦味酸成盐，用三氯甲烷提取该盐，再用pH11的缓冲溶液使其解离，苦味酸转溶到碱水液中进行比色，再换算出生物碱的含量；三是直接在pH4~5的缓冲溶液中加三氯甲烷提取生物碱苦味酸盐，三氯甲烷提取液在360nm直接比色测定;含有酯键结构的