药品检验操作规程.docx

非无菌产品检验操作规程 一、微生物计数法 1.供试液制备 （1）水溶性样品 取供试品10 g（ml），用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或TSB溶解或者稀释制成1:10供试液。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。 （2）水不溶非油脂类供试品 取供试品10 g（ml），用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或TSB制备成1:10供试液。分散力较差的供试品，可在稀释液中加入表面活性剂如0.1%的聚山梨酯80，使供试品分散均匀。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。 （3）油脂类供试品 取供试品10 g（ml），加入无菌十四烷酸异丙酯使溶解，或与最少量并能使供试品乳化的无菌聚山梨酯80或其他无抑菌性的表面活性剂充分你混匀。必要时，用稀释液或含上述表面活性剂的稀释液进一步10倍系列稀释。 2.计数方法 （1）平皿法 a：倾注法 取制备的供试液1 ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20 ml温度不超过45℃熔化的TSA或SDA,混匀，凝固，倒置培养。若使用直径较大的平皿，培养基的用量应相应增加。 b：涂布法 取15～20 ml温度不超过45℃的TSA或SDA ，注入直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用的适宜的方法使培养基表面干燥。若使用直径较大的平皿，培养基用量也相应增加。每一平板表面接种的供试液不少于0.1ml。 （2）薄膜过滤法 取供试液适量（一般取相当于1g、1ml、10 cm2的供试品，若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量），加至适量的稀释液中，混匀，过滤，用适量的冲洗液冲洗滤膜。 若测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于TSA平板上；若测定霉菌和酵母菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于SDA平板上。 3．抗菌活性的去除或灭活 （1）增加稀释液或培养基体积。 （2）加入适宜的中活剂或灭活剂。 （3）采用薄膜过滤法。 （4）上述几种方法的联合使用。 二、控制菌检查法 阳性对照试验 阳性对照试验方法同供试品的控制菌检查，对照菌的加量应不大于100 cfu。阳性对照试验应检出相应的控制菌。 阴性对照实验 以稀释剂代替供试液照相应控制菌检查，阴性对照试验应无菌生长。如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。 耐胆盐革兰阴性菌 供试液制备和预培养 取供试品，用TSB作为稀释剂照“微生物计数法（通则1105）”制成1:10供试液，混匀，在20～25℃培养，培养时间应使供试品中的细菌充分恢复但不增值（约2小时）。 a：定性试验 除另有规定外，取相当于1g或1ml供试品的上述预培养物接种至适宜体积（经方法适用性试验确定）肠道增菌液体培养基中，30～35℃培养24～48小时。如果平板上无菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰阴性菌。 b：定量试验 选择和分离培养 取相当于0.1g、0.01g、0.001g（或0.1ml、0.01ml、0.001ml）供试品的预培养物或其稀释液分别接种至适宜体积（经方法适用性试验确定）肠道增菌液体培养基中，30～35℃培养24～48小时。上述每一培养物分别划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～24小时。 结果判断 若紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上有菌落生长，则对应培养管为阳性，否则为阴性。根据各培养管检查结果，从表1查1g或1 ml供试品中含有耐胆盐革兰阴性菌的可能数。 表1 耐胆盐革兰阴性菌的可能数（N） 各供试品量的检查结果 每1g（或1ml）供试品中可能的菌数 cfu 0.1g或0.1ml 0.01g或0.01ml 0.001g或0.001ml + + + N＞103 + + - 102 ＜N＜103 + - - 10 ＜N＜102 - - - N＜10 注：（1）+代表紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上有菌落生长；-代表紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上无菌落生长。 （2）若供试品量减少10倍（0.01g或0.01ml、0.001g或0.001ml、0.0001g或0.0001ml），则每1g（或1ml）供试品中可能的菌落数（N）应相应增加10倍。 EE（左：白草香解郁安神胶囊+大肠埃希菌，中：+大肠埃希菌，右：空白） VRBG平板 (+大肠埃希菌) 2.大肠埃希菌 供试液制备和增菌培养 取供试品，照“微生物计数法（通则1105）”制成1:10供试液。取相当于1g或1ml供试品的供试液，接种至适宜体积（经方法适用性试验确定）的TSB中，混匀，30～35℃培养18～24小时。 选择和分离培养 取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35