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微生物学实验 ? 实验报告 PAGE v 6. 结果与讨论（Results and Discussion） （此处是实验报告的重点！根据计算和数据处理的结果，列表或作图，针对图表中的要素，分析其内在原因，并讨论、挖掘图表所反映的客观规律；对实验过程中的异常现象应详细讨论其可能的原因及改进或解决方法。特别注意此处不是误差分析，不要简单地将异常结果归因于实验误差！）。 6.1 采样地点 本次实验主要研究华侨大学内的白鹭湖水体。本组采取的水样位置为11号点环境，采样点位置、采样地点及经纬度见图1、图2、图3。 图1 华大白鹭湖采样点位置 图2 11号采样点环境 图3 11号采样地点经纬度 6.2 细菌总数的测定结果 6.2.1 培养结果 采样之后进行稀释，将水样稀释成3个梯度，之后使用涂布棒在事先制成的LB培养基上进行涂布，涂布后用密封袋包装好放到恒温培养箱中培养24h。第2天进行观察并计数，培养结果如图4。 图4 11号点水样培养结果 （a）11号点原液；（b）稀释1次；（c）稀释2次 6.2.2 细菌总数计数结果 培养后进行观察并计数，计数结果见表1。可以发现采样位置不同，菌落数量呈现较大差异，部分样品因涂布效果较差，造成无法计数。 表1 华大水体菌落总数 站位 编号 采样时间 温度 经度 纬度 100— 0.1 mL 10-10.01 mL 10-2--0.001 mL 总数 （cfu/mL） 11 2022/5/20 9:57 25 东经118°04′38″ 北纬24°36′25″ 468 不可计 148 1.5×10^5 6.3 水样中大肠菌群计数结果 6.3.1培养结果 采用滤膜法将细菌在伊红美兰培养基上进行选择培养，密封后放于恒温培养箱中培养24 h，培养结果如图5。 图5 11点水样培养结果 （a）11号点原液；（b）稀释1次；（c）稀释2次 6.3.2 大肠菌群计数结果 观察后进行计数，计数结果见表2。 表2 大肠菌群数统计 站位 编号 采样时间 温度 经度 纬度 1 ml 0.1 ml 0.01 ml 总数（cfu/l） 11 2022/5/20 9:57 25 东经118°04′38″ 北纬24°36′25″ 不可计数 69 12 6.9×10^5 7. 结论（Conclusions） （针对分析的讨论的结果，用比较简洁的语言归纳概括） 通过本次实验结果可知，华大湖水中根据采样点不同污染程度也不同，但大部分采样点污染较为严重。 8. 思考题（Questions） （1）试比较平板菌落计数法和显微镜直接计数法的优缺点及应用。 答：微生物显微镜直接计数法随机性大,所以对菌体数量不能做出较为宏观,全面的反应。显微镜直接计数法一般与血球计数板配套使用。但显微镜直接计数法的优点是快速,观察到马上可以计数。平板菌落计数法最大的缺点是速度慢,需要平板上长出菌落一段时间后才能计数。但是由于平板菌落计数法通常做梯度稀释,所以计数的线性范围大.由于是菌悬液涂布,所以比较均匀,能较好的反应菌落的疏密程度.重复性,平行性很好,是经典的计数方法。 （2）当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题在哪里？ 答：造成菌落分布不均匀的原因可能是涂布时没有涂均匀或者菌液没有完全被培养基吸收。 （3）测定水中细菌菌落总数有什么实际意义？ 答：水中细菌总数与水体受有机污染的程度成正相关。因此细菌总数常作为评价水体污染程度的一个重要指标。细菌总数越大，说明水体被污染得越严重。 （4）如何进行菌落数据统计？ 答：计数时应选取菌落数在30~300之间的平板（SN标准要求为25~250个菌落），若有二个稀释度均在30~300之间时，按国家标准方法要求应以二者比值决定，比值小于或等于2取平均数，比值大于2则其较小数字（有的规定不考虑其比值大小，均以平均数报告）。若所有稀释度均不在计数区间。如均大于300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如均小于30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之。如菌落数有的大于300，有的又小于30，但均不在30~300之间，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘以最低稀释倍数报告之。有的规定对上述几种情况计算出的菌落数按估算值报告。 （5）用滤膜法测细菌总数，该如何处理？（从滤膜孔径、培养基、过滤体积三个方面进行比较描述） 答：用无菌镊子夹取灭菌滤膜（选择孔径为0.45-0.65 μm的滤膜）边缘部分，贴放已灭菌的滤床上，稳妥地固定好滤器，将1 ml、0.1 ml、0.01 ml水样注入滤器中，加盖，打开滤器阀门，在负压0.5大气压下抽滤。水样过滤完后，暂不关过滤泵，取下滤器，于负压下用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放