第六章园艺植物的染色体工程35.pptVIP

二、雌配子途径 植物胚囊中具有单倍性染色体构成的细胞在适当的条件下可以发育成单倍体植株，这就是制备单倍体的雌配子体途径，常用的方法是通过未授粉子房和未授粉胚珠培养。或采用其他方法通过雌配子体途径获得单倍体。 1980年成功培养了未授粉的非洲菊、烟草的胚珠，获得了单倍体植株。 第三十一页，共五十六页。 显花植物花的结构图示 第三十二页，共五十六页。 第三十三页，共五十六页。 第三十四页，共五十六页。 第三十五页，共五十六页。 1.未受精子房或胚珠培养的意义 是以未受精子房或胚珠为外植体诱导单倍体的方法。1976年San Noeum首次在大麦未受精子房培养得到单倍体植株，并采用离体雌核发育来阐明单倍体产生的过程。目前已在向日葵、甜菜、黄瓜、洋葱、百合等园艺植物上获得了成功。 （1）目前部分植物花粉花药培养技术尚未成功建立或诱导频率过低，因此可以采用未受精子房或胚珠培养； （2）对于雄性不育植物也可以采用该方法培养单倍体； （3）未受精子房或胚珠培养获得的再生植株为绿苗，白化现象少； （4）未授粉子房或胚珠培养再生植株稳定； （5）雌雄异株植物可以采用未授粉子房或胚珠培养获得单倍体。 第三十六页，共五十六页。 2.雌核发育 胚囊中具有单倍性染色体构成的细胞都可以通过离体雌核发育产生单倍体植株，包括（1）助细胞或胚囊的无配子生殖产生单倍体；（2）卵细胞、助细胞和反足细胞发育产生单倍体；（3）非正常发育的大孢子四分体产生单倍体。 第三十七页，共五十六页。 3. 雌核发育的主要影响因素 （1）基因型：培养难易程度受基因型影响。 （2) 供体植株的生理状态：适宜生长条件下的供体植株，其未授粉子房和胚珠培养效果较好；生理年龄小，培养效果好。 （3）胚囊发育时期：接近成熟阶段的子房和胚珠易培养成功。 第三十八页，共五十六页。 （4）培养基成分： A. 植物激素 授粉胚珠：细胞分裂素对胚发育通常有促进作用。 未授粉胚珠：外源激素不利于向日葵孤雌生殖。矮牵牛未授粉胚珠培养不需激素，其他需要适当添加。 B.有机物：添加有机附加物可以促进授粉胚珠的发育。 C.蔗糖浓度：3-12%，通常5%，高浓度利于孤雌生殖。 第三十九页，共五十六页。 第四十页，共五十六页。 植物染色体工程是按照一定的设计有计划消减、添加和代换同种或异种染色体，引发产生各种整倍体变异和非整倍体变异，从而改良植物的遗传基础，培育符合人们需要的新种质或新品种的方法和技术。 第一页，共五十六页。 第一节 园艺植物单倍体的制备 单倍体（haploid）是指体细胞中含有本物种配子体（gametophyte）染色体数目的个体。制备园艺植物单倍体一般采用离体诱导法从具有单倍染色体数的性器官获得植株。其中，雄配子途径以雄性器官为外植体，经历雄核发育（androgenesis）获得单倍体；而雌配子途径以雌性器官及其相关结构为外植体，经雌核发育（gynogenesis）获得单倍体植株。 第二页，共五十六页。 一、雄配子途径 采用花药或花粉培养（或游离小孢子），即离体培养花药和花粉（小孢子），使小孢子改变原来的配子体发育途径，转向孢子体发育途径，形成花粉胚或花粉愈伤组织，最后形成花粉植株，从中鉴定出单倍体并加倍成纯合二倍体。 第三页，共五十六页。 离体条件下对植物的花粉或花药进行培养（Pollen Culture and Anther Culture）获得单倍体植株的技术最早是在1964年由印度植物学家Guha 和Maheshiwari在毛叶曼佗罗（Datura innoxia)的花药培养中成功获得单倍体植株。 目前已在250多种植物中由花药或花粉培养获得单倍体植株。 第四页，共五十六页。 花药和花粉（小孢子）培养的基本程序: 外植体的选择----预处理----表面灭菌----接种---- 培养----再生植株-----单倍体鉴定----染色体加倍---- 获得纯合二倍体。 第五页，共五十六页。 第六页，共五十六页。 （1）材料的表面灭菌与无菌操作： 对花蕾进行表面灭菌，然后分离花药和花粉。 （2）花粉的分离与清洗： 花药漂浮培养自然释放法：把花药接种在液体培养基上，花药漂浮于液体表面经1-7天的培养，药壁开裂，花粉自然散落下来．及时将花药壁从培养瓶取出，留下的花粉继续培养。 第七页，共五十六页。 机械分离法 A.分离：把花药放在玻璃容器中，加入一定量适当浓度的蔗糖溶液，加入适量液体培养基，用注射器内筒轻轻挤压花药把花粉挤出来。或用磁力搅拌器把花药搅裂使花粉散出来。 B.过筛：把上述的花药残