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罗 氏 ( R o c h e公) 司 T u n e 试l 剂 盒 操 作 说 明 书 (In situ cell death detection kit-O)D 一、 原理： TUNEL (TdT-mediated dUTP nick end labelin)g 细胞凋亡检测试剂盒是用 来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核 DNA 的断裂情况。其原理是荧 光素( fluorescei)n标记的 dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶( TdT Enzyme )的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂 DNA 的 3’-OH 末端，并 与连接辣根过氧化酶 (HRP ，horse-radishperoxidase)的荧光素抗体特异 性结合，后者又与 HRP 底物二氨基联苯胺 (DAB )反应产生很强的颜色反 应(呈深棕色)，特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下 即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有 DNA 断裂， 因而没有 3‘-OH 形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本(石 蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)在单细胞水平上的凋 亡原位检测。还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞 死亡类型和分化阶段。 二、 器材与试剂 器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒(塑料饭盒与纱布)、