Folin-酚试剂法测定蛋白质含量.docVIP

Folin-酚试剂法测定蛋白质含量 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量 实验目的 1，掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理及其具体实验操作技术； 2，掌握制作标准曲线的要领； 3，学会通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。 实验原理 1，蛋白质分子中含有的肽键在碱性条件下可以与 Cu2+螯合形成蛋白质- Cu2+复合物，即发生双缩脲反应。而此复合物中的含酚羟基的酪氨酸或色氨酸残基可以还原Folin-酚试剂的磷钼酸盐-磷钨酸盐，产生蓝色化合物（钼蓝和钨蓝的混合物），即发生Folin-酚显色反应。同时，在碱性条件下Folin-酚试剂极不稳定，从而易被蛋白质还原而呈蓝色反应。 2，在一定浓度范围内，蓝色化合物的蓝色深浅与蛋白质浓度呈正比。故通过测定相应浓度梯度的蛋白质标准溶液吸光度可依其作出标准曲线，以此绘制的标准曲线和供试品中蛋白质溶液吸光度可求出供试品中蛋白质的含量。 材料和方法 样品：健康人血清（300倍稀释）；正常人血清蛋白质含量：60~80 g/L 试剂：牛血清白蛋白标准液（200μg/ml）；碱性硫酸铜溶液（现配）；Folin-酚试剂 仪器与器材： V-1100分光光度计； 恒温水浴箱；试管6支、试管架； 加样枪、加样枪架； 坐标纸 C，以500nm波长比色，以1号管作空白对照，按2-6顺序每隔一分钟测定一支试管内溶