分子生物学研究方法下.ppt

6 分子生物学研究方法（下）——基因功能研究技术;6. 1 基因表达研究技术;图6-1常规SAGE方法（short SAGE）基本流程;;6.1.2 RNA的选择性剪接技术;图6-2选择性剪接的不同类型;图6-3 RT-PCR检测5个拟南芥转录调控因子基因的选择性剪切;图6-4果蝇（Drosophila melanogaster）的Dscam基因可以通过可变剪接产生38000多种可能的mRNA异构体;6.1.3原位杂交技术;;mRNA的互补链，杂交信号集中于纤维细胞中。;;6.1.4基因定点突变(site-directedmutagenesis).;图6-6寡核苷酸介导的DNA突变技术;;图6-7重叠延伸介 导的定点诱变;图6-8大引物诱变法示意图;PCR介导的定点突变方法的优势;6.2基因敲除技术;;基因敲除分为 完全基因敲除：是指通过同源重组法完全 消除细胞或者动物个体中的靶基因活性 条件型基因敲除：（又称不完全基因敲 除），是指通过定位重组系统实现特 定时间和空间的基因敲除。;;图6-9用取代型（a）或插入型（b）载体进行完全基因敲除实验;图6-10正负筛选法（PNS法）筛选已发生同源重组的细胞;;;①构建条件型基因敲除打靶载体，将正向选择标记neo置于靶基因的内含子中，并在靶基因重要功能域两侧内含子