基因工程的酶学基础.pptVIP

第三节 DNA聚合酶和反转录酶 一、大肠杆菌DNA聚合酶I 用途： 1） 除去3’-端突起的单链DNA（在无dNTP时） 2） 补齐5’-突起端 3） 合成第二条cDNA 4） 切口平移制备探针 Klenow片段 第六十三张，课件共八十八张，编辑于2022年5月 第三节 DNA聚合酶和反转录酶 二、Klenow片段 　（一）基本性质 　　　大肠杆菌DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶处理，获得N端三分之二的大肽段，即Klenow片段。 　　　Klenow片段仍拥有5`→3`的DNA聚合酶活性和3`→5`的核酸外切酶活性，但失去了5`→ 3`的核酸外切酶活性。 第六十四张，课件共八十八张，编辑于2022年5月 第三节 DNA聚合酶和反转录酶 二、Klenow片段 　（二）用途 　 1. 3’端补平：补平限制性内切酶切后形成的3’隐蔽端。 　2. DNA 3’末端标记:在3’隐蔽端加上放射性标记的dNTP。 3. cDNA第二链的合成 。 4. Sanger双脱氧末端终止法进行DNA序列分析。 第六十五张，课件共八十八张，编辑于2022年5月 第三节 DNA聚合酶和反转录酶 三、T4噬菌体DNA聚合酶 （一）T4 DNA酶的基本特性 　　　有3`→5`的核酸外切酶活性和5`