基因工程目的基因的获取.pptVIP

（2）载体与基因组DNA大片段的连接 ① 粘性末端直接连接 载体与外源DNA大片段的两个末端都有相同的粘性末端。 如：Sau3A与BamHI的酶切末端。 直接连接、人工接头或同聚物加尾。 ②人工接头法（adapter） 人工合成的限制性内切酶粘性末端片断。 第三十张，课件共六十九张，编辑于2022年5月 各种酶的接头可以向公司定做或购买。 接上人工接头 粘性末端 CCC CCC 末端转移酶 粘性末端 ③ 同聚物加尾 第三十一张，课件共六十九张，编辑于2022年5月 第三十二张，课件共六十九张，编辑于2022年5月 限制酶切位点 限制酶消化 除去中间片段 cos L R cos cos L 左臂 R cos 右臂 真核生物染 色体DNA 限制酶部分消化 外源DNA与载体DNA混合 连接反应 体外包装 用重组噬菌体 感染大肠杆菌 ~20 Kb DNA 片段 cos L R cos ~20 Kb 外源 DNA 片段 基因组文库 第三十三张，课件共六十九张，编辑于2022年5月 酵母人工染色体基因组文库的构建 第三十四张，课件共六十九张，编辑于2022年5月 4. 基因组文库的大小 一个文库要包含99%的基因组DNA时所需要的克隆数目。 N= ln (1-p) ln (1-f) p: 文库包含了整个基因组DNA的概率（99%） f: 插入载体的DNA片