DB23∕T 3234-2022 野生越桔根际土壤可培养细菌、真菌资源调查技术规程.docxVIP

DB23 ICS 65.020.01 CCS B 05 黑 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T 3234—2022 野生越桔根际土壤可培养细菌、真菌资源 调查技术规程 2022-05-25发布 2022-06-24实施 DB23/T 3234—2022 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 I DB23/T 3234-2022 野生越桔根际土壤可培养细菌、真菌资源调查技术规程 1 范围 本文件规定了野生越桔(Vaccinium vitis-idaea L.)根际土壤可培养细菌、真菌资源调查的野外调查、 微生物分离纯化、微生物鉴定及结果、调查结果和调查档案。 本文件适用于野生越桔根际土壤可培养细菌、真菌的资源调查。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 1736—2009 微生物肥料菌种鉴定技术规范 3 术语与定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 野外调查 4.1 工具与器材 定位仪、采集刀（铲）、冰盒、纸袋、塑封袋、记录本、记录笔、标签、数码相机、测绳（100 m）、 手摇皮尺（100 m）、钢卷尺（5 m）、枝剪、捆绳、天平、铁锹、土壤环刀、土壤铝盒等。 4.2 调查对象 通过查阅资料、实际踏查，了解调查地区野生越桔分布状况、生态类型及其伴生植被种类，选定调 查区域及不同群落的野生越桔作为调查对象。 4.3 调查内容 野生越桔的生物学特性及生境信息（见附录 A）、根际土壤样品采集。 4.4 调查方法 4.4.1 野生越桔的生态学特性及生境调查 采用样方调查法。选择代表性植物群落，在结果期进行调查采样。随机设置 3个 5 m×5 m的样方， 各样方间距离大于 10 m。记录样方的经纬度、海拔高度及伴生植被种类等，拍摄生境数码照片。每个 样方随机选取 5株生长良好的越桔，分别测量其植株高度、基径等指标，作为样方的基础数据。 剪去地上植物，利用直径 5 cm的土钻分 0 cm～10 cm、11 cm～20 cm、21 cm～30 cm 三层收集土 壤样品，五点取样并混合，室内风干，过 2 mm筛后保存。 1 DB23/T 3234-2022 4.4.2 根际土壤样品采集 采用五点采样法。选取样方内正常生长的越桔植株，去除地上腐殖质及表层土壤，顺着植株主根进 行挖掘，采集 5 cm～30 cm土层的越桔根部，轻轻去掉根系表面附着物及大块土壤，不应伤到根系，轻 轻抖落根部附着土壤，未抖落的留存土为根际土，用无菌毛刷收集根际土。收集时带一次性橡胶手套。 五份根际土壤混合放入无菌封口袋中，附上标签，记录采样信息。将取得土样立即放入冰盒保存，带回 实验室 4℃冰箱保存。 5 微生物分离纯化 5.1 越桔根际土壤可培养细菌分离与纯化 5.1.1 细菌分离与纯化培养基 根际土壤可培养细菌分离与纯化培养采用营养肉汤培养基，按附录 B 中 B.1 规定执行。固氮菌分 离与纯化培养采用 Ashby 无氮培养基，按附录 B 中 B.2 规定执行。放线菌分离与纯化培养采用高氏一 号培养基，按附录 B中 B.3规定执行。 5.1.2 细菌分离与纯化方法 采用稀释平板涂布法分离、纯化。取 1 g根际土壤（干重），按附录 C规定执行，置于内含玻璃珠 和 99 mL 无菌水的锥形瓶中，180 rpm 震荡 30 min，制成土壤悬浊液。取土壤悬浊液 1 mL，采用连续 稀释法配成浓度为 10 、10 、10 、10 、10 、10 的土壤悬浊液。取浓度梯度为 10 、10 、10 的土 -1 -2 -3 -4 -5 -6 -4 -5 -6 壤悬浊液，每一浓度吸取 100 μL，涂布于固体培养基，每一浓度重复涂布 3次。细菌在 37℃培养 48 h。 观察菌落的大小、形状、质地、边缘、隆起、颜色、光泽、透明度。放线菌在 28℃培养 5 d～10 d，观 察菌落的大小、形状、气生菌丝及基内菌丝的颜色。将不同形态