基因分离与克隆.pptVIP

⑴ 核酸杂交法: 以特殊标记的寡核苷酸链为探针 将扩增好的cDNA文库（即许多带有cDNA重组体大肠杆菌培养皿内所形成的菌落或噬菌斑）转印到硝酸纤维素膜上，碱解后加带标记的探针进行杂交，能显示特异结合探针的点（克隆）便是目的基因所在处。确定菌落或噬菌斑的位置，扩增，提取，再用限制性酶切出cDNA基因片断，即为目的基因。（如图） 4. 筛选目的基因 第六十三张，课件共九十六张，编辑于2022年5月 第六十四张，课件共九十六张，编辑于2022年5月 ⑵ 免疫结合法 噬菌斑转印到硝酸纤维膜上，各种cDNA表达并呈现在噬菌体表面的蛋白质便牢固地结合在膜上。然后将膜放入含有特异抗体的溶液中进行免疫结合反应，洗去未结合的抗体后，再与125 I 标记的第二抗体结合, 从而找出带有放射性示踪信号的斑点, 进而找出对应噬菌斑, 克隆扩增, 提取DNA后经酶切可获目的基因。 第六十五张，课件共九十六张，编辑于2022年5月 基因组文库 cDNA文库 信息供体 DNA mRNA 载体 噬菌体，黏粒，人工染色体 质粒，噬菌体 连接前 部分酶切，分级分离