基因工程基本原理及操作程序.ppt

基 因 工 程;基因工程的概念;苏云金杆菌;基因工程的概念;DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ——DNA连接酶; 特点：一种限制酶只能识别DNA的一种核苷酸序列，并在特定的位点切割DNA.;限制性内切酶;限制酶切割的是么？;切割DNA分子后形成什么？; 会产生互补的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。;整理ppt; 将双链DNA分子片段“缝合”起来，恢复两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。;;;DNA连接酶的种类;;特点： 1.结构简单，能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2.具多种限制酶的单一切点，以便与外源基因连接。 3.具有某些标记基因，便于进行筛选。 4.对宿主细胞没有伤害。;;一、目的基因的获取;①从基因文库中获取目的基因;基因组文库;cDNA文库的构建;;;;②利用PCR技术扩增目的基因;目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。;启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 标记基因：为了鉴别受体细胞中是否导入了目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来;①用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。 ②用_____________切断目的基因，使其产生____________;三、将目的基因导入受体细胞;农杆菌转化法 农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。 原理：Ti质粒上的T—DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。;基因枪法： 单子叶植物; 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 转基因受精卵 转基因动物;显微注射法; 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受 态细胞吸收DNA分子;四、目的基因的检测与鉴定;四、目的基因的检测与鉴定; DNA分子杂交原理：互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链，即能够进行杂交。这种结合是特异的，即严格按照碱基互补配对进???。 因此，当用探针和转基因生物的DNA杂交时候，如果出现杂交带（用特殊的显影装置可以看见），则说明目的基因已插入受体细胞的染色体DNA中。;整理ppt;②检测目的基因是否转录出了 mRNA;基因工程的基本操作程序;此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！