第六章免疫学食品检测技术及其进展PPT课件.ppt

? ? ? ? 第一部分 品系特异性芯片-针对品系特异性的探针 第二部分 物种特异性芯片-针对内标基因的探针 第三部分 筛选特异性芯片-针对筛选元件的探针 第四部分 对照探针 Generated by Foxit PDF Creator ? Foxit Software For evaluation only. 基因芯片检测技术 ? 芯片探针的设计 利用基因芯片定量检测转基因成分 ? 通过特殊设计的样品DNA扩增方法实现定量检测的目的。 ? 芯片PCR技术 1、在芯片上固定反向引物作为探针 2、特异性靶标与引物退火结合 3、固定引物延伸 4、变性后正向引物退火延伸 5、特异性序列在芯片上扩增 基因芯片检测技术 Generated by Foxit PDF Creator ? Foxit Software For evaluation only. 利用Tiling芯片检测未知的转基因产品 ? 根据一系列的转化载体作为参考序列设计高密度的基因芯片，然后将全基因 组DNA直接与芯片杂交，以检测未知的转基因物种。 ? 设计25bp长度的探针对235个植物转化载体的双链序列(约2兆个碱基)进行覆 盖。通过筛选得到37257个探针。 ? 利用该芯片检测出了3种转化载体或者T-DNA序列未知的转基因拟南芥和水稻 品系。 ? 该方法的灵敏度仅要求样品DNA中含有一段大于140bp的与参考序列匹配的 片段存在即可得到阳性结果。 Torstein Tengs et al BMC Biotechnology 2007, 7:91 基因芯片检测技术 Generated by Foxit PDF Creator ? Foxit Software For evaluation only. 图中粗黑线为部分检测结果，以及该序列在基因组上的位置。但 该结果表明此方法目前只能检测离散的转基因通用元件。 基因芯片检测技术 Generated by Foxit PDF Creator ? Foxit Software For evaluation only. 基因芯片技术在转基因检测中的应用前景 ? 集成芯片，利用一块芯片可以检测目前商业化的转基因品 系。 ? 定量芯片，更加精确和高通量的定量检测芯片技术。 ? Tiling芯片，检测未知转基因样品并可对其分子特征进行 描述。 ? 高密度基因组芯片，研究转基因事件的非预期效应，包括 在基因组水平上的DNA的插入、缺失、扩增、位移等以及 转录组水平上基因表达的沉默、激活、上调、下调等。 基因芯片检测技术 Generated by Foxit PDF Creator ? Foxit Software For evaluation only. ? ? ? ? Multiplex-PCR (conventional PCR) Multiplex-PCR& CGE Multiplex-PCR& Microarray Multiplex-PCR& SYBR Green I Generated by Foxit PDF Creator ? Foxit Software For evaluation only. 复合PCR检测技术 定义 是指在一个单一反应体系中加入一对以上的特异引物对，从 而同时扩增多个序列。 方法分类 Multiplex-PCR 传统复合定性PCR的方法 通过优化各个引物对之间的浓度比，达到同时特异性扩增的目的。 同时扩增8种转基因玉米的多重PCR——Hari k. et al,2008 复合PCR检测技术 Generated by Foxit PDF Creator ? Foxit Software For evaluation only. 检测LOD可以达到0.25%，这种方法快速，灵敏，高特异性， 价格低廉，方便操作，可用于日常转基因产品的检测。 Hari k. et al,2008 复合PCR检测技术 Multiplex-PCR (conventional PCR) Generated by Foxit PDF Creator ? Foxit Software For evaluation only. Multiplex-PCR& CGE 多重PCR结合酶切分析-毛细管电泳检测 基于多重PCR产物的扩增，其特异性引物在一 端都标记了6-FAM的荧光基团。 PCR产物通过特异性的内切酶进行酶切消化，从 而产生特异性的酶切片段。 酶切片段进行毛细管电泳（CGE)的荧光检测， 通过产生预期的荧光信号，从而确定转基因陈 分的存在