Ecadherin和CAR在人膀胱癌细胞中的表达及其意义（行业资料）.docVIP

Ecadherin和CAR在人膀胱癌细胞中的表达及其意义（行业资料） 文档信息 ： 文档作为关于“行业资料”中“医学资料”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文5216字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：Ecadherin和CAR在人膀胱癌细胞中的表达及其意义 1 1 材料与方法 2 2 结 果 3 3 讨 论 3 文2：Galectin3和Ecadherin蛋白在胃癌中的表达及其意义 5 1资料与方法 6 参考文摘引言： 8 原创性声明（模板） 9 文章致谢（模板） 9 正文 Ecadherin和CAR在人膀胱癌细胞中的表达及其意义（行业资料） 文1：Ecadherin和CAR在人膀胱癌细胞中的表达及其意义 膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤，在国内其发病率居泌尿系统恶性肿瘤第一位，多为移行上皮来源，具有多发和容易复发的特点。肿瘤细胞间黏附性下降是肿瘤侵袭转移的重要环节。本研究检测了上皮型钙黏素(Ecadherin)和柯萨奇腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor， CAR)两种细胞黏附分子在多种人膀胱移行癌细胞中的表达，探讨Ecadherin和CAR与膀胱癌侵袭转移的关系。 1 材料与方法 材料 细胞株 人膀胱癌细胞株RT4、5637、253J、T24和J82，由美国Emory大学Leland WK Chung教授馈赠。 主要抗体 兔抗人Ecadherin多克隆抗体(Santa Cruz公司)由美国Emory大学Leland WK Chung教授馈赠，兔抗人CAR多克隆抗体(Santa Cruz公司)，小鼠抗人GAPDH单克隆抗体购自上海KangChen BioTech公司，辣根酶标记的羊抗兔和羊抗鼠二抗均购自北京中山生物技术有限公司。 显色试剂 ECL显色试剂购自美国Ameham Bioscience公司。 方法 细胞培养 所有细胞株用含100g/L胎牛血清(杭州四季青公司)的DMEM培养液(美国Gibco公司)在37℃、5%(体积分数)CO2的培养箱内培养。 蛋白提取 生长状态良好的细胞其数目达到培养皿(培养瓶)底面积80%-90%后，弃去培养液，用磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗后，加入RIPA裂解液，将细胞充分裂解，用细胞刮刮下裂解物并转移至 Eppendrof管中，用旋涡混匀器充分混匀，冰上静置10min，然后在4℃条件下，15000min离心15min，提取上清总蛋白。留取10μL上清液用标准的bradford法定量。其余上清加入上样缓冲液(loading buffer)后在沸水中煮沸5min变性。 Western印迹 按每孔20μg上样，100g/L聚丙烯酰胺凝胶(SDSPAGE)电泳分离，再用30V电压将凝胶上的蛋白转至硝酸纤维素膜(NC膜)上。50g/L脱脂奶粉将膜封闭1h后，加入一抗(兔抗人Ecadherin，稀释度为1∶500;兔抗人CAR，稀释度为1∶300;小鼠抗人GAPDH，稀释度为1∶10000)，常温孵育，洗涤液(TBST)充分漂洗后加入辣根酶标记的二抗(羊抗兔IgG，稀释度为1∶3000;羊抗小鼠IgG，稀释度为1∶3000)孵育1h。最后用ECL显色试剂显色。应用Glyko Bandscan对显色条带进行灰度分析。 2 结 果 Ecadherin和CAR在RT4、5637、253J细胞中均表达，其中在RT4细胞中表达均最高，在5637细胞中表达次之，253J细胞中表达均最低。Ecadherin在J82、T24细胞中均不表达，CAR在J82中表达很低，在T24中不表达。 3 讨 论 本研究中，人膀胱癌细胞株RT4、5637、235J、J82、T24均来源于移行上皮，但其分化程度、细胞形态却有很大差异。RT4、5637细胞分化良好，其中RT4细胞具有较典型的上皮细胞形态。253J分化中等，具有部分间变性质。J82、T24细胞分化较差，恶性度高[12]。而肿瘤细胞间黏附与细胞本身生物性特性直接相关。本研究通过检测上述膀胱癌细胞株表面重要的黏附分子Ecadherin和CAR，探讨两者的表达情况与肿瘤细胞恶性程度的关系，揭示两者在膀胱癌侵袭转移过程中的作用。 钙黏附蛋白是一组介导同一种细胞互相黏附的钙依赖性的跨膜糖蛋白。包括上皮组织中的E钙黏素(Ecadherin)，肌肉和成人神经组织中的N钙黏素(Ncadherin)，胎盘组织中的P钙黏素(Pcadherin)等亚族成员[3]。其中Ecadherin是研究得最多、与肿瘤转移关系最