标准溶液配制范例.docxVIP

实验一硫酸铜标准曲线的制作 一、目的与要求 1、掌握分光光度比色法的基来源理和应用； 2、熟悉标准曲线的意义及掌握制作方法； 3、认识光谱光度法技术的详细内容及应用； 4、认识回归剖析法。 二、原理 光电比色法是根据溶液颜色深浅的比较来测定物质含量的一种方法。因此，在原理上应 用了有色溶液对光吸收的物理定律即Lambert-Beer定律。 常用的光电比色法： 1．标准曲线法：剖析大批样品时，采用此法比较方便，但需要预先制作一条标准曲线 （（或称工作曲线），以供一段时间使用。 配制一系列浓度由小到大的标准溶液，在溶液吸收最大的波长下，测出它们的吸光度。 在标准溶液的一定浓度范围内，溶液的浓度与其吸光度之间呈直线关系，即被测物质对光的 吸收切合Lambert-Beer定律，则必定会获得一条经过原点的直线，即标准曲线（见图1）。 以各标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度（A）为纵坐标，在方格坐标纸上绘出标 准曲线，在制作标准曲线时，测出的数据起码要有三个落在直线上，这样的标准曲线方可使用。 比色测定待测样品时，操作条件应与制作标准曲线时相同。测出吸光度后，从标准曲线 上能够直接查出它的浓度，并计算出待测物质此后只需测定条件不变，将测出的样品溶液吸光订值代入该回归方程式，则可计算出样品溶液的浓度。 2．标准管法（即标准比较法）：在相同的条件下，配制标准溶液和待测样样品溶液的有 色溶液，并测定它们的吸光度。由两者吸光度的比较，能够求出待测样品溶液的浓度。 待测样品溶液的吸 待测样品溶液的浓 光度 ×标准溶液的 度= 浓度 标准溶液的吸光度 3．标准系数法（即计算因数法）：此法较上两法更加简单。将多次测定标准溶液的吸光 度算出平均值后，按下式求出标准系数。 标准系数标准液浓度 =标准液吸光度 4．回归剖析法：将制作标准曲线的各样标准溶液浓度的数值，与其相应的吸光度值， 1 用数理统计中的回归剖析法求出一个回归方程式。此后只需测定条件不变，将测出的样品溶 液吸光度值代入该回归方程式，则可计算出样品溶液的浓度。 三、操作与计算 1．硫酸铜贮备标准液的配制（含铜量 20000μg/ml）:精准称取CuSO4·5H2O，置于100ml 烧杯中，用L硫酸溶解后，移入 500ml容量瓶中，用少量L硫酸冲刷烧杯3次，洗液一并转 入容量瓶中，用L硫酸稀释至刻度，将该液放置阴凉处，如发现积淀浑浊，应从头配制。 2．应用标准液的配制：用 5ml移液管，按下表要求，将硫酸铜贮备标准液用 L硫酸 在中号试管内稀释，摇匀，置阴凉处备用。 应用标准液浓度 贮备标准液 L硫酸 编号 （20000μg/ml，ml） （ml） （μg/ml） 1 1000 2 2000 3 3000 4 4000 3．绘制硫酸铜标准曲线：分别从编号试管中，吸取硫酸铜应用标准液，加到光径1cm 的比色杯中。用分光光度计，以L硫酸作空白调零点，在690nm波长处，测定1-4号试管中溶液的吸光度（A）；每一溶液重复测3次，取其平均值，以各试管浓度为横坐标，各试管溶液的吸光值为纵坐标，用坐标纸绘制出硫酸铜标准曲线。 4．未知硫酸铜溶液浓度的计算：取未知硫酸铜溶液加入比色杯中（若过浓可稀释5-10 倍），用分光光度计，在690nm波长处测定吸光度。以此吸光度值可在硫酸铜标准曲线上查 出未知硫酸铜溶液的浓度。 思考题： 1．标准曲线是怎样设计的，有何临床意义 2．未知硫酸铜溶液的浓度是怎样求出的 3．何谓回归剖析法 （库热西·玉努斯） 2 附：光谱光度法剖析技术 利用各样化学物所拥有的射、吸收或散射光系（、）的特点，来确定物的性、构和含量的技称光光度剖析技。 光光度剖析技包括射光剖析、 吸收光剖析和散射光剖析三大， 与其 的器列表如下（表1）： 表1 光光度剖析与其的器 光剖析型 器名称 1、各样 射光 2、火焰光度法 3、原子光光 4、光比色 1、各样光比色 吸收光 2、各样可光区及紫外光划分光光度 3、各样外光划分光光度 4、原子吸收分光光度 1、各样度 散射光 2、各样乳光 3、各样生物光度 生物体内有多物成分含量甚微， 不能用重量剖析法或溶量剖析法去定， 而常用比 色法来定，法敏捷、快速、正确，是目前常用的一种定量剖析法。 一、比色法原理 比色法是根据溶液色深浅的比来定物含量的一种方法， 在原理上用了有色溶 液光吸收的物理定律——Lambert-Beer 定律。 Lambert定律： 一束色光通一有色溶液后， 由于溶液吸收了一部分光能， 透光的度就会减弱。 若溶液的度不，溶液的厚度越大（即在溶液中所的途径越） 。透光的减弱也越 著。 若I0=光通溶液前的度（入射光度） =光通溶液后的度（透光度） b=溶液的厚度 Ⅰ Ⅰ。 b ??① 图 常数K1的数随光的波和溶液的性而改。 Lambert