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会计学;实验目的:;材料:花椰菜/昆虫组织
设备:移液器,高速离心机,水浴锅,培养箱 。
试剂:
1. CTAB组织消化液
2. 氯仿
3. 无水乙醇
4. TE缓冲液;CTAB溶液配制;实验原理(CTAB法);实验步骤(常温操作,2人一组);12000rpm离心5min,缓缓倒掉上清液(剩余的液体可以用移液器吸走),管底的沉淀即DNA(无色透明胶状物!);
加入200ulTE缓冲液(含50ug/ml RNase),轻弹管底,以溶解DNA;也可以用枪头缓慢地来回吸放液体来帮助溶解DNA。此时应该可以看到片状的DNA沉淀物逐渐变少,最终消失。(一定要使DNA完全溶解于TE中,否则影响电泳效果!);
将DNA溶液置于37 ℃ 培养箱或水浴中30min(降解残留的RNA) ;
-20 ℃ 保存备用。
取5~10ulDNA(加适量loading buffer)电泳检测;取2ulDNA测定浓度和OD260/280(下次课电泳检测)。
;基因组DNA的检验(纯度);基因组DNA的检验(完整性); M 1 2 3 4 5 6 M 1 2 3 4 5 6 ;核酸的贮存——DNA保存;无水乙醇沉淀
沉淀前往往加入NaCl等盐离子,作用是中和核酸分子表面的负电荷,减少分子间的排斥力,有助于分子之间的聚集。
无水乙醇可以吸收分子之间的水,使DNA沉淀析出,;基因组DNA提取的用途;下次课程
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