检测技术上岗培训-艾滋病检测技术.ppt

流式细胞仪(Flow Cytometer，FCM)是一项集激光技术、电子物理技术，光电测量技术、计算机技术、细胞荧光化学技术以及单克隆抗体技术为一体的高科技仪器。概括起来讲，流式细胞技术就是对处在快速直线运动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数的、快速定量分析和分选技术。 流式细胞技术 流式细胞仪 （FACSCalibur ，BD公司） 项目 检测对象 方法 备注 抗体检测* * HIV抗体 初筛、确认实验 容易操作、灵敏度高，可判定感染 抗原检测 HIV抗原 (P24) ELISA 灵敏度低，不能判定感染 核酸检测 HIV DNA、RNA RT PCR、NEST PCR、bDNA、NASBA、荧光PCR 需必要设备、不易普及 病毒检测 HIV 病毒培养 难度大，需在P3实验室操作 CD4T淋巴细胞检测 CD4细胞 流式细胞仪 需特定仪器，但操作简单 总结  107 快速检测法的优先使用 技术角度需要考虑： 需要快速得到结果、免去试剂和样本的冷链运输环节、小空间实验室的成本效益、检测的简单性等。 优先使用包括： 应急、门诊急诊，如VCT、母婴传播、临床评估、农村血检、术前检测、紧急事件等。 HIV快速检测的局限性 一般不用于血液筛查 有一定的假阳性反应 窗口期问题：有一定的假阴性反应（尤其暴露时间3个月）HIV抗体快速检测具有快速优势，但是“快速”并不意味着对早期感染者的快速诊断，因为HIV感染后产生抗体应答需要一段时间，存在窗口期（即从暴露至最早检测出的时间），即使采用分子生物学试验，也有1～2周的窗口期。 唾液检测试剂 优点： 样品稳定,各种温度下稳定性大于3周; 敏感性和特异性与标准的血清学实验相当。 缺点： 预处理复杂，重复性较差; 会出现不同于血清抗体的种类和滴度。 尿液检测试剂 优点： 1、采集处理费用低，较血液安全； 2、HIV抗体在尿中稳定； 3、尿液中IgG与血液相当。 最早应用于采血困难和凝血障碍者，如静脉吸毒者、血友病患者、婴幼儿。尿液中存在抗体而无活的病毒，针对检测过程和检测操作人员相对安全。 缺点： 1、 精确性低于血液。 2、 阳性者需作血清学检测。尿液检测阳性结果不能作为合法报告，须经血清学检测证实。 3、价格相对较昂贵。 关于试剂选择－－国家要求 我国对艾滋病试剂有何要求 ? 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。国家艾滋病预防与控制中心参比实验室每年对HIV抗体初筛诊断试剂进行临床评估，定期公布试剂评估结果。 检测策略 仪器设备条件 试剂的灵敏度特异性 应用的普遍性和接受度 筛查试剂的选择 试剂质量查询： 全国HIV抗体诊断试剂临床质量评估 / 2011 年全国HIV 抗体诊断试剂临床质量评估报告 阴性－－报告“HIV抗体阴性” 阳性－－出具“HIV抗体待复检”报告 （1）不能出阳性报告。 （2）同时尽快进行以下处理： 在广州市疾病预防控制中心数字化信息系统填写送检病例信息，打印送检单，重新采血，两份血和纸质版送检单一并送筛查中心或确证实验室； 做检测后咨询； 初筛阳性告知。（注意告知技巧） 筛查检测结果的报告和处理 *****医院检测报告 姓名： 性别： 年龄： 科别： 检测时间： 结果： HIV抗体阴性 阴性检测结果报告 *****医院检测报告 姓名： 性别： 年龄： 科别： 检测时间： 结果： HIV抗体待复检 阳性检测结果报告 抗体筛查试验的局限性 阳性结果需用其他试剂复查以及确证。 阴性结果有时不能排除HIV感染: (1)在感染早期，血清阳转前存在“窗口期”，在感染晚期，某些抗体可能检测不到（如p24抗体）。 (2)反应中抗体过量，抗原抗体比例不合适而不能形成特定结构，出现凝集抑制。 HIV-Ab的确证实验 免疫印迹（ Western Blot,WB ）** 免疫荧光（IFA） 条带免疫(LIA) 放射免疫沉淀(RIPA) WB原理 HIV抗体WB实验的阳性判断标准 1 3 2 4 GP160 GP120 P66 P55 P51