第二章 动物细胞大规模培养和专用.pptVIP

第1页，共30页，编辑于2022年，星期一 为什么? 动物细胞培养对生产生物工程产品,特别是功能蛋白质方面的优势: 1)同源性,直接进行翻译后加工,蛋白质可直接折叠成正确的构象 2)有利于产品的分离纯化 第2页，共30页，编辑于2022年，星期一 市场需求:目前全世界蛋白治疗药物的迅速增长和市场需求已远远超过了现有生产能力。 生产产品:动物细胞规模化生产重组蛋白和抗体的工艺选择可考虑使用当前较成熟的工业化支持技术平台，以缩短产品工艺研发的时间，加快工业化进程。 当前被FDA批准的生物技术产品以及公开发表的生产工艺占有主流优势的是搅拌式生物反应器悬浮培养， 工艺设计是流加或灌流培养。 其大规模细胞培养生产所面临的挑战，是获得最大生产力的同时注重维持产品的质量；去除所有培养环境中外源因子的污染，更为精确有效的工艺控制手段，规模化培养中氧气的限定与溶解CO2浓度累积的控制等。 一个特殊而前景无量的生物反应器:动物乳泉生物反应器 第3页，共30页，编辑于2022年，星期一 第一节 常用的培养方法 动物细胞有两种类型: 1）非贴壁依赖性细胞 (血液、淋巴组织、肿瘤组织） 2）贴壁依赖性细胞 （大多数动物细胞，包括非淋巴组织的细胞和许多异倍体细胞） 培养方法 1、贴壁培养 2、悬浮培养 3、固定化培养 第4页，共30页，编辑于2022年，星期一 一.贴壁培养 概念:贴壁依赖性细胞在培养中要贴附于壁上才能迅速铺展,开始有丝分裂并迅速进入对数生长期,这种培养方式就叫贴壁培养.多数动物细胞的培养都采取这种方式. 第5页，共30页，编辑于2022年，星期一 一.贴壁培养 微载体培养的优点: 表面积/体积比大; 微载体悬浮于培养基中,细胞生长环境均一,便于监测和控制; 培养基利用率高; 采样重演性好; 收获过程不复杂; 放大较容易; 劳动强度小,占用空间小. 第6页，共30页，编辑于2022年，星期一 二.悬浮培养 概念:是指细胞在培养器中自由悬浮生长的过程.主要用于非贴壁依赖性细胞培养,如杂交瘤细胞等. 是在微生物发酵的基础上发展起来的;可以借鉴微生物发酵的经验; 由于动物细胞比较脆弱,所以在搅拌通气等方式上必须比微生物培养更加温和. 第7页，共30页，编辑于2022年，星期一 三.固定化培养 概念:利用吸附或包埋等固定化的方式将细胞限制在一定的空间内,然后以固定化的颗粒进行悬浮培养.该方法对贴壁性和非贴壁依赖性细胞都是适合的. 常用的包埋培养方法:对非贴壁依赖性细胞常用海藻酸钙包埋;对贴壁依赖性细胞常用胶原包埋. 第8页，共30页，编辑于2022年，星期一 第二节 动物细胞培养的操作方式 分为5种:分批式、流加式、半连续式、连续式、灌注式 第9页，共30页，编辑于2022年，星期一 一、分批式操作： 概念：是将细胞和培养液一次性装入反应器内，进行培养，细胞不断生长，产物也不断形成，经过一段时间后，将整个反应系取出。 培养过程：滞后期、对数生长期、减速期、稳定期、衰退期 优点：操作简便，容易掌握，是最常用的方式； 缺点：不能使细胞自始至终处于最优条件下。 第10页，共30页，编辑于2022年，星期一 二、流加式操作： 概念：先将一定量的培养液装入反应器，，在培养过程中随着细胞对营养物质的不断消耗，新的营养成分不断补充至反应器内，使细胞进一步代谢，到反应终止时取出整个反应系。 特点： 1）能够调节培养环境中的营养物质浓度； 2）整个过程中反应体积是变化的。 第11页，共30页，编辑于2022年，星期一 存在二种流加方式： 无反馈控制流加： 反馈控制流加： 最常见的流加物质：葡萄糖、谷氨酰胺等能源和碳源 第12页，共30页，编辑于2022年，星期一 三、半连续式操作（反复分批式、换液培养）： 概念：在分批培养操作的基础上，不全部取出反应系，剩余部分重新补充新的营养成分，再按分批式操作方式进行培养，反应器内培养液的总体积保持不变。 优点：可反复收获培养液，对培养基因工程动物细胞分泌有用产物或病毒培养过程比较实用。 第13页，共30页，编辑于2022年，星期一 四、连续操作： 概念：在培养过程中一方面新鲜培养液不断加入反应器内，另一方面又将反应液连续不断地取出，使反应条件处于一种恒定状态。 优点：维持细胞一直处于优化状态下，促进细胞生长和产物的形成；对细胞生理和代谢规律的研究是一种重要的手段。 第14页，共30页，编辑于2022年，星期一 五、灌注式操作培养： 概念：细胞培养过程中一方面不断加入新鲜培养基，另一方面又将反应液连续不断地取出，但细胞留在反应器内，使细胞处于一种不断的营养状态。 优点：可以把培养过程保持在稳定的、废代谢物低于抑制水平下的状态。 第15页，共30页，编辑于2022年，星期一 第三节 细胞培养过程的放大