(2.4.1)--4.1薄层色谱鉴别法.pptVIP

薄层色谱鉴别法 又称薄层层析法，简称TLC。将供试品溶液，点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与标准物质按照相同方法所得色谱图对比。 特点：专属性较强，设备简单、分析速度快、分离效率高、结果直观。 薄层色谱法 是目前应用最广泛的薄层色谱法。 薄层色谱法 b 将样品AB，两个组份的溶液分别点在薄层板的一端，在密闭容器中用适当的溶剂展开，吸附系数大的组分在薄层板上的迁移速度慢，而吸附系数小的组分在薄层板上迁移速度快，经过一段时间后被完全分离，在薄层板上形成两个斑点。 例： 薄层色谱法 ①按照固定相类型：正相薄层板、反相薄层板、 高效薄层板。硅 正相薄层板：常用的如硅胶薄层板； 反向薄层板: 如碳18键合相薄层板。 高效薄层板: 目前硅胶薄层板是使用最广的薄层板，如硅胶g、硅胶GF、硅胶h和硅胶HF等。 ②目前使用的薄层板有市售薄层板和自制薄层板两种。 一般市售薄层板分离效果较自制薄层板效果好，如果需要特殊薄层板时，可采用自制薄层板。 涂布器应能使固定相或者载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。分为无黏合剂和粘合剂两种。等。 （1）无粘合剂：将固定相直接涂布于玻璃板上。 （2）有粘合剂：应在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10%~%15的烧石灰混合后加水适量使用，或用0.2%~0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液，调成糊状，均匀涂布于玻板上。 （1）手动点样：主要用微升毛细管、微量注射器或与之相应的手动点样仪。 （2）自动点样：采用半自动点样仪或全自动点样仪，按预设程序自动点样。 点样分为手动点样或者自动点样。 微升毛细管 微量注射器 点样仪 对于有色物质的分离，展开后直接观察斑点颜色，对于有荧光极少数具有紫外吸收的物质，可在紫外灯下观察有无暗斑或荧光斑点，并划出斑点位置，记录其颜色强弱，再进行定性或定量分析。 又称展开缸，为大小适宜的密闭展开容器，并有严密的盖子。 显色设备包括喷雾显色、浸渍显色以及蒸汽熏蒸显色等。 薄层色谱法鉴别的常用方法 ①采用与供试品浓度相同的对照溶液，在同一块薄层板上点样展开与检视。 薄层色谱法鉴别的常用方法 供试品溶液所显主斑点的颜色或荧光与位置，应和对照溶液的主斑点一致，而且两者主斑点的大小与颜色深浅也大致一致。则可判定为两者为同一物质。 薄层色谱法鉴别的常用方法 ②将供试品溶液与对照品溶液等体积混合，应显单一紧密的斑点。 ③选用与供试品化学结构相似的药物，对照品溶液与供试品溶液的主斑点比较，两者位置应不同。 ④将与供试品化学结构相似的药物对照品溶液与供试品溶液等体积混合，显现两个清晰分离的斑点。 薄层色谱法 ①采用与供试品浓度相同的对照溶液，在同一块薄层板上点样展开与检视，供试品溶液所显主斑点的颜色或荧光与位置，应和对照溶液的主斑点一致，而且两者主斑点的大小与颜色深浅也大致一致。则可判定为两者为同一物质。 薄层色谱法 ②将供试品溶液与对照品溶液等体积混合，应显单一紧密的斑点。 ③选用与供试品化学结构相似的药物，对照品溶液与供试品溶液的主斑点比较，两者位置应不同。 ④将与供试品化学结构相似的药物对照品溶液与供试品溶液等体积混合，显现两个清晰分离的斑点。 盐酸洛美沙星片的鉴别 ①取本品的细粉适量，加0.1mol每升的盐酸溶液并稀释制成500ug每毫升的含洛美沙星溶液。振摇过滤，取续滤液作为供试品溶液。 盐酸洛美沙星片的鉴别 ②另取洛美沙星对照品适量，用相同的方法制备成对照品溶液。 盐酸洛美沙星片的鉴别 ③照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一GF254，薄层板上，并且以三氯甲烷，甲醇铵制氯化氨溶液为展开剂展开晾干。 盐酸洛美沙星片的鉴别 ④置于紫外灯下检视，供试品溶液所显主斑点的位置和颜色，应与对照品溶液主斑点的位置和颜色相同。 薄层色谱法 鉴别时需考虑比移值、分离度、检出限及相对标准偏差是否符合统适应性试验的要求。 可移值供试品溶液主斑点与对照品溶液主斑点的比移值进行比较。除另有规定外，杂质检查时，比值应在0.2~0.8之间。鉴别时，供试品与标准品的斑点均应清晰分离，检查及含量检测时，除另有规定分离度应大于1.0。 薄层色谱法 检出限：一般采用已知浓度的供试品溶液和对照品溶液，与稀释若干倍的自身对照标准溶液，在规定的色谱条件下，在同一薄层上点样展开检视，后者显示清晰可辨斑点的浓度或量作为检出限。 相对标准偏差：同一供试品溶液在同一薄层板上平行点样，待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差应小于等于5.0%，显色后测定的相对标准偏差应小于等于10%。 薄层色谱法