人教版生物选修15.3 血红蛋白的提取和分离 学案2.pdfVIP

血红蛋白的提取和分离 【学习目标】 本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物 大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习 运用这些技术打下基础。 【学习重难点】 1．凝胶色谱法的原理和方法。 2．样品的预处理:色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 【学习过程】 一、凝胶色谱法 1．概念 也称 ___________；是根据___________分离蛋白质的有效方法。 2．原理 （1）由___________构成的凝胶，内部有许多贯穿的的___________。 （2）当___________不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量___________的蛋白质容易 进入凝胶内部的通道，路程___________，移动速度___________，而相对分子质量___________ 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在___________移动，路程___________，移动速度 ___________，从而使___________不同的蛋白质分子得以分离。 二、缓冲溶液 1．作用 在一定范围内，抵制___________的___________对溶液pH 的影响，维持pH 。 2．配制 由___________种缓冲剂溶解于___________中配制而成，通过调节缓冲剂的___________ 就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。 三、电泳 1．概念 指___________在电场的作用下发生___________的过程。 2．原理 1 / 3 在一定的___________下，___________、___________等生物大分子的可解离基团会带上 ___________或___________的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷___________的电极 移动。 3．作用：电泳利用了待分离样品中各种分子___________的差异及分子本身的___________ 的不同，使带电分子产生不同的___________，从而实现样品中___________的分离。 4．方法：常用的电泳方法有___________和___________。测定蛋白质分子量时通常用 ___________。 。 四、实验操作 1．样品处理 通过___________、___________、___________等操作收集血红蛋白溶液。 （1） 红细胞的洗涤 目的是___________。分离时采取___________，直至上清液中没有___________，表明红 细胞已洗涤干净。 （2） 血红蛋白的释放 在___________和___________的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。 （3） 分离血红蛋白溶液 把___________离心后，将试管中的液体用___________过滤、除去___________，于 ___________中静置片刻后，分离出下层的___________。 2．粗分离：即透析 （1）方法 将血红蛋白溶液装入___________，将___________放入一定量适宜浓度的___________中， 透析___________。 （2）目的 将___________的杂质除去。 （3）原理 透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。 3．纯化 通过凝胶色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。操作如下： （1）凝胶色谱柱的制作。 （2）凝胶色谱柱的装填。 （3）样品的加入和洗脱。 2 / 3 五、重点、难点突破 （1）是否完成对血液样品的处理。 观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图5-18），如果分层不明显，可能是 洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴 细胞一同沉淀，也得不到纯净的红