Western_blot_试剂配制及操作流程.docxVIP

蛋白提取试剂Western-Blot操作流程试剂配制 蛋白提取试剂 1. RIPA裂解液： 10mM Tris（MW121.14，PH7.5 ） 1%NP40 0.5%TritonX-100 0.2%脱氧胆酸钠 2 mM EDTA 1 mM PMSF 20%甘油 调pH值至7.5。 工作液混匀后4℃保存，长期保存于-20℃。使用时，加入蛋白酶抑制剂cooktail。 工作液 制胶用（1-6）： 1.0mol/L Tris·HCl （pH6.8） Tris (MW121.14) 12.114g 蒸馏水 100ml 溶解后，（用浓盐酸调pH至6.8），室温下保存。 1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8） Tris (MW121.14) 18.671g 蒸馏水 100ml 溶解后，（用浓盐酸调pH至8.8），室温下保存。 10％SDS SDS 10g 蒸馏水至 100ml 如溶解困难，可在50℃水浴下溶解，室温保存。 如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。 10％过硫酸胺（AP） 过硫酸胺 0.1g 蒸馏水 1ml （现用现配，可先将过硫酸胺干粉称好分量后放在1.5mlEP管中，一次性多装几管，使用时加入蒸馏水水即可，溶解后，4℃保存，保存时间为1周） 四甲基乙二胺原液（TEMED）： 4?C保存。 30%丙稀酰胺： 4?C保存。 10%下层胶，即分离胶（两块胶，15m