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油污土壤中脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件优化（行业资料） 文档信息 ： 文档作为关于“行业资料”中“自然科学资料”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文6855字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：油污土壤中脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件优化 1 文2：大庆油污土壤中石油降解菌的筛选和鉴定研究 9 1实验方法 10 3结论展望 11 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 13 正文 油污土壤中脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件优化（行业资料） 文1：油污土壤中脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件优化 ＤＯＩ：１０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ０４３９－８１１４．２０１５．１６．０４４ 收稿日期：２０１４－１２－１６ 基金项目：中国农业大学烟台研究院科研基金项目（ＹＴ２０１１０２） 作者简介：曲 威（１９８２－），女（满族），辽宁抚顺人，助理研究员，博士，主要从事微生物资源研究，（电话）（电子信箱）ｑｕｗｅｉ０５０６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ；通信作者，徐榕雪（１９８２－），女，山东烟台人，助理研究员，博士，主要从事生物资源研究，（电子信箱）ｘｕｒｏｎｇｘｕｅ１９８２＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ。 脂肪酶（ｌｉｐａｓｅ，ＥＣ ３．１．１．３）是一类广泛存在于微生物和动植物细胞中的水解酶，能在油水界面催化甘油三酯生成甘油及脂肪酸［１］，因其在非水相条件下催化反应可逆，可用于催化醇解、酯化和酯交换反应［２］。生物来源的脂肪酶由于反应条件缓和，对环境污染小，成本低，被广泛应用于食品、制革、饲料、洗涤和油脂水解等工业领域［３，４］，并且在生物柴油的制备、地沟油的回收利用等方面有不可替代的应用价值［５］ 在自然界中，脂肪酶主要存在于动物胰脏、植物种子和微生物中，由于微生物种类多、繁殖快，并且所产生的脂肪酶一般都是分泌性的胞外酶，比动物脂肪酶酶解作用的ｐＨ和温度范围更宽［６］，适合于工业化大生产和获得高纯度样品，因此微生物脂肪酶是工业用脂肪酶的重要来源。 本研究从山东东营胜利油田附近被废油长期污染的土壤中成功筛选出一株产脂肪酶效果较好的菌株，经过鉴定，确定为铜绿假单胞菌，命名为Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ Ｓ８，并对其产酶的培养条件进行优化，得到该菌产酶的最佳发酵条件，以期为脂肪酶的生产提供优良酶源。 １ 材料与方法 １．１ 材料 土样：采自东营胜利油田被废油严重污染的土壤，共１６份。 富集培养基：酵母粉２ ｇ／Ｌ，橄榄油１０ ｇ／Ｌ，ＫＨ２ＰＯ４ ３ ｇ／Ｌ，Ｎａ２ＨＰＯ４ １ ｇ／Ｌ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．５ ｇ／Ｌ，ｐＨ ７．０。 筛选培养基：酵母粉 ２ ｇ/Ｌ，橄榄油乳化液 ２０ ｇ/Ｌ，（ＮＨ４）２ＳＯ４ ２ ｇ／Ｌ，ＮａＣｌ ０．０５ ｇ／Ｌ，ＫＨ２ＰＯ４ ０．１５ ｇ／Ｌ，Ｎａ２ＨＰＯ４ ０．３５ ｇ／Ｌ，琼脂 ２ ｇ／Ｌ，罗丹明 Ｂ ０．００５ ｇ／Ｌ（过滤除菌），ｐＨ ７．０。 橄榄油与聚乙烯醇（体积分数为２％）以１∶３（体积比）的比例混合，搅动乳化５ ｍｉｎ，即成乳白色聚乙烯醇橄榄油乳化液［７］ 种子培养基：蛋白胨２ ｇ／Ｌ，葡萄糖 ２ ｇ／Ｌ，酵母粉 ２ ｇ／Ｌ，ＮａＣｌ ３ ｇ／Ｌ，Ｋ２ＨＰＯ４ １ ｇ／Ｌ，ｐＨ ７．０。 发酵培养基：蛋白胨２ ｇ／Ｌ，葡萄糖 ２ ｇ／Ｌ，（ＮＨ４）２ＳＯ４ １ ｇ／Ｌ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ １ ｇ／Ｌ，ＫＨ２ＰＯ４ １ ｇ／Ｌ，ｐＨ ７．０。 碳源筛选培养基：酵母粉２ ｇ/Ｌ，（ＮＨ４）２ＳＯ４ ２ ｇ/Ｌ，ＮａＣｌ ０．０５ ｇ／Ｌ，ＫＨ２ＰＯ４ ０．１５ ｇ／Ｌ，Ｎａ２ＨＰＯ４ ０．３５ ｇ／Ｌ，ｐＨ ７．０，分别加入蔗糖、葡萄糖、可溶性淀粉、乳糖、麦芽糖作为碳源。 氮源筛选培养基：葡萄糖 ２ ｇ／Ｌ，ＮａＣｌ ０．０５ ｇ／Ｌ，ＫＨ２ＰＯ４ ０．１５ ｇ／Ｌ，Ｎａ２ＨＰＯ4 ０．３５ ｇ／Ｌ，ｐＨ ７．０，分别加入酵母粉、蛋白胨、尿素、（ＮＨ４）２ＳＯ４、ＫＮＯ３作为氮源。 １．２ 试验方法 １．２．１ 产脂肪酶菌种筛选 １）富集培养。每种土样称量５.0 ｇ，加入２０ ｍＬ无菌水，振荡制成土壤悬液。取每种土壤悬液各５ ｍＬ加入装有３０ ｍＬ富集培养基的三角瓶中，将三角瓶置于３０ ℃摇床振荡培养３ ｄ。富集3次。 ２）初筛培养。将过滤灭菌的罗丹明Ｂ加入到已灭菌的初筛培养基中，倒平板。从富集培养的菌液中取1 ｍＬ菌液，用去离子水进行系列梯度稀释后涂布在平板中，３０ ℃培养３ ｄ后，在３５０ ｎｍ紫外光下观察，产生脂肪酶的菌株周围会出现荧光圈，且这种荧光圈越大，脂肪酶活