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两种方式提取杏鲍菇菌丝胞外酶的比较分析（教学资料） 文档信息 ： 文档作为关于“高等教育”中“生物学”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文6380字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：两种方式提取杏鲍菇菌丝胞外酶的比较分析 1 文2：从赭曲霉菌丝体中提取甲壳素的工艺研究 7 1 材料与方法 9 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 两种方式提取杏鲍菇菌丝胞外酶的比较分析（教学资料） 文1：两种方式提取杏鲍菇菌丝胞外酶的比较分析 ＤＯＩ：１０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ０４３９－８１１４．２０１５．０２．０43 研究食用菌胞外酶的活性，对了解不同食用菌的胞外酶分泌特点、活性大小及动态变化趋势、推测不同食用菌在不同生长发育阶段对培养基中木质纤维素、淀粉等大分子营养成分的降解动态、提高栽培技术有重要的意义［１］。在研究胞外酶活性时，能够有效提取菌丝胞外酶是测定酶活性的前提。因此，选择一种有效的提取菌丝胞外酶的方法对研究胞外酶的活性具有重要意义。目前，食用菌胞外酶的提取方法主要有２种：一是用水处理的方式提取［２－４］；二是用酸处理的方式提取［５］。到目前为止，尚未见有人用同一种酶对这两种提取方式进行比较分析。由于仪器和试验操作等方面的误差，使得酸性纤维素酶、果胶酶，木聚糖酶、淀粉酶等胞外酶的提取尚无可以参考的标准。从研究的需要出发，本研究以杏鲍菇（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｅｒｙｎｇｉｉ Ｑｕｅｌ）菌丝为研究对象，通过酸、水２种不同的处理方式提取杏鲍菇菌丝胞外酶，并通过测定酶的活性对这２种方式进行分析比较，以期找到一种有效的提取胞外酶的方法，为今后杏鲍菇等食用菌胞外酶的提取提供理论参考。 １ 材料与方法 １．１ 供试菌株 杏鲍菇“杏－１”，由湖南省食用菌研究所提供，杏鲍菇栽培采用棉子壳培养基：７１％棉子壳、２１％麦麸、４％玉米粉、２％白糖、２％碳酸钙，自然ｐＨ，含水量６０％。采用常规方式拌料、装袋，１００ ℃灭菌１８ ｈ，冷却后接杏鲍菇栽培种，每一菌袋接栽培种约３ ｇ，置入 ２２～２５ ℃、湿度７５％、ＣＯ２浓度在５００～１ ０００ mg/kg的条件下培养，大概３５ ｄ长满菌丝［６］ １．２ 试剂 羧甲基纤维素钠、木聚糖、果胶和半乳糖醛酸为Ｓｉｇｍａ公司产品，柠檬酸、无水葡萄糖、木糖、乙酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、邻联甲苯胺、纤维二糖、丙二酸，丙二酸钠、ＡＢＴＳ、黎芦醇、果胶、硫酸锰、牛血清蛋白、ＰＢＳ缓冲液、考马斯亮蓝染液、酒石酸、双氧水、酒石酸甲钠、３，５－二硝基水杨酸、可溶性淀粉为国产分析纯。 １．３ 试验方法 １．３．１ 粗酶液制备 菌丝长满菌袋后， 在袋中取长满菌丝的培养料充分混匀，然后取４０ ｇ均匀分成２份，一份加去离子水（以下简称水）５０ ｍＬ，一份加ｐＨ ４．８柠檬酸缓冲液（以下简称酸）５０ ｍＬ，２０ ℃振荡浸提４ ｈ，过滤后，４ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｍｉｎ，上清液即为粗酶液。 １．３．２ 木质素降解相关酶类酶活测定 １）漆酶酶活的测定。相关试剂配置和酶活计算公式参照Ｗｏｌｆｅｎｄｅｎ等［７］的方法，其酶活单位定义为１ ｍｉｎ催化ｌ ｍｏｌ底物的酶量。准确移取１００ ｍｍｏｌ／Ｌ丙二酸—丙二酸钠缓冲液、０．６ ｍｍｏｌ／Ｌ ＡＢＴＳ溶液各１０ ｍＬ。混合摇匀，３０ ℃水浴。取上述混合试剂ｌ ｍＬ于１．４ ｍＬ的比色皿中，４２０ ｎｍ处调零。准确加入待测酶液Ｘ μＬ（Ｘ＝0～５０），立即记录吸光度。每隔３０ ｓ记录１次，共３次。取平均值，折算成每分钟的吸光度变化（ＯＤ４２０变化） ２）锰过氧化物酶酶活的测定。相关试剂配置和酶活计算公式参照Ｗａｒｉｉｓｈｉ等［８］的方法，其酶活单位定义为ｌ ｍｉｎ氧化１ μｍｏｌ ＭｎＳＯ４的酶量。准确移取１００ ｍｍｏｌ／Ｌ丙二酸—丙二酸钠缓冲液０．５ ｍＬ于１．４ ｍＬ的比色皿中，加入１０ ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｎＳＯ４溶液０．１ ｍＬ，准确加入待测酶液Ｘ μＬ （Ｘ＝０～５０），加入去离子水（４００－Ｘ） μＬ，３０ ℃水浴，加入浓度为１０ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｈ２Ｏ２溶液０．０１ ｍＬ启动反应，迅速测定２７０ ｎｍ处的吸光度，ｌ ｍｉｎ后再测定１次，计算二者之差，即为每分钟的吸光度变化（ＯＤ２７０变化） ３）木质素过氧化物酶酶活的测定。相关试剂配置和酶活计算公式参照Ｔｉｅｎ等［９］的方法，其酶活单位定义为１ ｍｉｎ氧化ｌ μｍｏｌ黎芦醇的酶量。准确移取２００ ｍｍｏｌ／Ｌ酒石酸缓冲液０．５ ｍＬ于１．４ ｍＬ的比色皿中，加入４０ ｍｍｏｌ／Ｌ黎芦醇０．１ ｍＬ。准确