实验七-生化反应与血清学鉴定(黄小凤).pptVIP

实验七 生化反应与血清学实验 一、生化反应 实验目的 掌握细菌生化反应的原理和临床意义。 熟悉鉴别细菌常用的生化试验原理、方法和结果判断。 生化实验原理 由于各种细菌含有的酶系统不同，对各种营养物质的分解能力和分解产物亦不同，据此可在培养基中加入底物和指示剂，通过颜色的变化来区别和鉴定细菌。 实验原理 细菌产生的酶 产物 底物 鉴定产物 实验材料 1．菌种： 大肠埃希菌、沙门氏菌 2．微量生化反应管： 葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、蛋白胨水（靛基质）、硫化氢。 3．试剂： 吲哚试剂 实验方法 用接种针分别将大肠埃希菌、沙门氏菌穿刺接种于各生化反应管内，37℃培养18～24h观察结果。 1.单糖发酵试验 （1）原理： （2）方法：利用接种针将大肠埃希菌、沙门氏菌分别穿刺接种于5种糖生化反应管内，37℃孵育18～24h后观察结果。 细菌产生的酶 酸 糖 （酸碱指示剂） 气体 （3）结果判断： 本次用的酸碱指示剂为溴甲酚紫（中性或碱性呈紫色，酸性条件下呈黄色）首先观察细菌是否生长，细菌生长后，培养基呈混浊.可能出现3种结果 1.单糖发酵试验 ＋ － ＋ 2.靛基质试验 （1）原理： （2）方法：利用接种针将菌种接种于靛生化反应管内，37℃孵育18～24h后加入靛基质试剂，最后观察结果。 细菌产生的 色氨酸酶 吲哚 （无色） 色氨酸 靛基质试剂 玫瑰吲哚 （红色） 2.靛基质试验 （3）结果判断：上层呈红色为阳性，不变色为阴性 阳性 3.硫化氢试验 （1）原理： （2）方法：利用接种针将大肠埃希菌或沙门氏菌穿刺接种于硫生化反应管内，37℃孵育18～24h后观察结果。 细菌产生的酶 硫化氢 含硫的氨基酸 硫化铁 黑褐色 或硫化铅 3.硫化氢试验 （3）结果判断：变黑色为阳性反应，不变色为阴性。 二、血清学鉴定 实验目的 掌握细菌血清学鉴定法 实验原理 根据抗原抗体反应高度特异性的特点，在疾病诊断中可用抗原、抗体任何一方作为已知条件来检测另一未知方。 实验材料 菌种 沙门菌 试剂 多价沙门菌O(A-F)诊断血清 其他 无菌载玻片 沙门菌的主要抗原组成 主要有O、H、Vi Ag O Ag：至少58种,以1、2、3等阿拉伯数字顺序排列。凡含相同抗原组分归为一个组，引起人类疾病的沙门菌大多数在A~F组 H Ag：分为第Ⅰ和第Ⅱ相两种，第Ⅰ相以a、b、c等小写字母表示，第Ⅱ相以1、2、3等阿拉伯数字表示 Vi Ag：抗原性弱，不稳定,可阻止O抗原与其相应的抗体起凝集反应. 沙门氏（11种）血清一览表 O2 O4 O7 O9 Ha Hb Hc Hd Hi Vi A-F群多价O A-F群多价O 实验方法 50微升血清+沙门菌 50微升NS+沙门菌 结果判断 阳性：可见颗粒状凝集物 阴性： 均匀混浊 群别 菌 型 抗 原 o H A 甲型副伤寒沙门菌 1,2,12 a:- B 乙性副伤寒沙门菌 德比沙门菌 鼠伤寒沙门菌 1,4,5,12 1,4,12 1,4,5,12 b:1,2 f,g:- i:1,2 C 猪霍乱（或丙型副伤寒）沙门菌 6,7,(Vi) c:1,5 D 伤寒沙门氏菌 9,12,Vi d:- E 鸭沙门氏菌 3,10 e,h:1,6 F 阿伯丁沙门氏菌 11 i:1,2 沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原表 注意事项 1．生理盐水中不出现凝集颗粒，诊断血清中的颗粒凝集才有阳性意义。 2．沙门菌Vi抗原存在时可阻止O抗原与相应抗体发生凝集，故在做玻片凝集时应加注意，需事先加热破坏Vi抗原，O抗原才得以与相应的O诊断血清发生凝集。 生化实验试验进程 2人1组，每组领取两种菌种，每人领取7种生化反应管 每组1人专门接种大肠杆菌，另1人专门接种沙门氏菌 37℃培养18～24h后观察并比较其结果。 血清学实验进程 分为4小组，每组领取一盒诊断血清，4支沙门菌种，每人鉴定一种。先鉴定A－F和Vi，根据结果再进行其他鉴定。 A－F 鉴定结果 Vi 鉴定结果 实验进程 - - 判断为非沙门氏菌属，不再继续鉴定其他抗原成分。 + - 初步判断为沙门氏菌属，继续鉴定其他抗原成分。 - + 初步判断为沙门氏菌属，但需去除菌体Vi荚膜后再继续鉴定其他抗原成分。